植物組織培養包括2個(gè)過(guò)程,脫分化和再分化。
1.外植體(被培養的組織塊--葉片碎片植物組織培養的過(guò)程、莖尖、幼胚等或細胞--去壁的葉肉細胞)細胞恢復分裂,形成大量的細胞--愈傷。這個(gè)過(guò)程是脫分化。由于是已經(jīng)成熟的細胞脫離了成熟細胞的狀態(tài),回到類(lèi)似胚胎階段的狀態(tài),故稱(chēng)脫分化。
2.愈傷組織的細胞經(jīng)過(guò)誘導,分化形成根、莖、葉等器官甚至形成類(lèi)似種子中的胚一樣的結構--胚狀體(體胚),這個(gè)過(guò)程就是再分化。
一個(gè)完整的植物組織培養過(guò)程一般包括以下幾個(gè)步驟:
(1)準備階段
查閱相關(guān)文獻,根據已成功培養的相近植物資料,結合實(shí)際制訂出切實(shí)可行的培養方案。然后根據實(shí)驗方案配制適當的化學(xué)消毒劑以及不同培養階段所需的培養基,并經(jīng)高壓滅菌或過(guò)濾除菌后備用。
(2)外植體選擇與消毒
選擇合適的部位作為外植體,采回后經(jīng)過(guò)適當的預處理,然后進(jìn)行消毒處理。將消毒后的外植體在無(wú)菌條件下切割成一定大小的小塊,或剝離出莖尖,挑出花藥,接種到初代培養基上。
(3)初代培養
接種后的材料置于培養室或光照培養箱中培養,促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織,或頂芽、腋芽直接萌發(fā)形成芽。然后將愈傷組織轉移到分化培養基分化成不同的器官原基或形成胚狀體,最后發(fā)育形成再生植株。
(4)繼代培養
分化形成的芽、原球莖數量有限,采用適當的繼代培養基經(jīng)多次切割轉接。當芽苗繁殖到一定數量后,再將一部分用于壯苗生根,另一部分保存或繼續擴繁。進(jìn)行脫毒苗培養的需提前進(jìn)行病毒檢測。
(5)生根培養
剛形成的芽苗往往比較弱小,多數無(wú)根,此時(shí)可降低細胞分裂素濃度或不加,提高生長(cháng)素濃度,促進(jìn)小苗生根,提高其健壯度。
(6)煉苗移栽
選擇生長(cháng)健壯的生根苗進(jìn)行室外煉苗,待苗適應外部環(huán)境后,再移栽到疏松透氣的基質(zhì)中,注意保溫、保濕、遮蔭,防止病蟲(chóng)危害。當組培苗完全成活并生長(cháng)一定大小后,即可移向大田用于生產(chǎn)。
如:莖尖→表面消毒→接種誘導培養基→莖尖生長(cháng)→病毒檢測鑒定→培養無(wú)根小植株→培養生根→完整小植株→煉苗20-25天→移栽成活。
對不同的品種詞流程會(huì )略有差異,如進(jìn)行果樹(shù)育苗還需進(jìn)行嫁接等操作流程,但對組培工廠(chǎng)化育苗而言,一般可根據上面的流程圖來(lái)安排各項作業(yè),只有相互銜接好、配合好,才能提高生產(chǎn)效益。
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