獲取目的基因的方法(詳細(xì))(獲取目的基因的方法詳細(xì))
1.獲取目的基因的方法有哪些（詳細(xì)）
1.從基因文庫(kù)中獲取 這個(gè)沒什么就是現(xiàn)成的基因儲(chǔ)存在受體菌上你用的時(shí)候提取出來(lái)就好了（基因組文庫(kù)法 就是原教材中的用限制性內(nèi)切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫(kù)的一般操作程序如下：① 選用特定限制性內(nèi)切酶， DNA進(jìn)行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當(dāng)處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進(jìn)行體外重組。④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個(gè)DNA的重組DNA群體，即文庫(kù)。）經(jīng)典解釋
2.cDNA文庫(kù)法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫(kù)，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫(kù)法來(lái)獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫(kù)比其cDNA文庫(kù)大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達(dá)真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過(guò)程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達(dá)。因此，在基因工程中，cDNA文庫(kù)法是從真核生物細(xì)胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”，又叫“散彈射擊法”。這種方法有如用獵槍發(fā)射的散彈打鳥，無(wú)論哪一顆彈粒擊中目標(biāo)，都能把鳥打下來(lái)。鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內(nèi)切酶）將供體細(xì)胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過(guò)運(yùn)載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細(xì)胞中大量復(fù)制（在遺傳學(xué)中叫做擴(kuò)增），從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來(lái)。如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用“鳥槍法”獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性。
人工合成
1.（主要是序列已知的基因）。主要是通過(guò)DNA自動(dòng)合成儀，通過(guò)固相亞磷酸酰胺法合成，具體過(guò)程可以網(wǎng)上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個(gè)一個(gè)連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對(duì)于大的基因一般是先用化學(xué)合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍，使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研 究和檢測(cè)鑒定。過(guò)去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑
2.獲取目的基因的常用方法是哪種
..剛好學(xué)到 基因工程流程的第一步就是獲得目的DNA片段，如何獲得目的DNA片段就成為基因工程的關(guān)鍵問(wèn)題。
所需目的基因的來(lái)源，不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有PCR法、化學(xué)合成法、cDNA法及建立基因文庫(kù)的方法來(lái)篩選直接獲取 1.從基因文庫(kù)中獲取 這個(gè)沒什么就是現(xiàn)成的基因儲(chǔ)存在受體菌上你用的時(shí)候提取出來(lái)就好了（基因組文庫(kù)法 就是原教材中的用限制性內(nèi)切酶直接獲取。
利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫(kù)的一般操作程序如下：① 選用特定限制性內(nèi)切酶， DNA進(jìn)行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當(dāng)處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進(jìn)行體外重組。
④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個(gè)DNA的重組DNA群體，即文庫(kù)。）
經(jīng)典解釋 2.cDNA文庫(kù)法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫(kù)，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。
雖然可用基因組文庫(kù)法來(lái)獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫(kù)比其cDNA文庫(kù)大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達(dá)真核生物DNA。
而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過(guò)程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達(dá)。因此，在基因工程中，cDNA文庫(kù)法是從真核生物細(xì)胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”，又叫“散彈射擊法”。這種方法有如用獵槍發(fā)射的散彈打鳥，無(wú)論哪一顆彈粒擊中目標(biāo)，都能把鳥打下來(lái)。
鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內(nèi)切酶）將供體細(xì)胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過(guò)運(yùn)載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細(xì)胞中大量復(fù)制（在遺傳學(xué)中叫做擴(kuò)增），從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來(lái)。如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用“鳥槍法”獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性。 人工合成1.（主要是序列已知的基因）。
主要是通過(guò)DNA自動(dòng)合成儀，通過(guò)固相亞磷酸酰胺法合成，具體過(guò)程可以網(wǎng)上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個(gè)一個(gè)連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對(duì)于大的基因一般是先用化學(xué)合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍，使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研 究和檢測(cè)鑒定。
過(guò)去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑他只是給目的基因的擴(kuò)增 好累~。
3.獲得目的基因有幾種主要方法
獲得目的基因常用的方法有PCR法、化學(xué)合成法、cDNA法及建立基因文庫(kù)的方法來(lái)篩選直接獲取1.從基因文庫(kù)中獲取 這個(gè)沒什么就是現(xiàn)成的基因儲(chǔ)存在受體菌上你用的時(shí)候提取出來(lái)就好了（基因組文庫(kù)法 就是原教材中的用限制性內(nèi)切酶直接獲取。
利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫(kù)的一般操作程序如下：① 選用特定限制性內(nèi)切酶， DNA進(jìn)行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當(dāng)處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進(jìn)行體外重組。
④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個(gè)DNA的重組DNA群體，即文庫(kù)。）
經(jīng)典解釋2.cDNA文庫(kù)法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫(kù)，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。
雖然可用基因組文庫(kù)法來(lái)獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫(kù)比其cDNA文庫(kù)大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達(dá)真核生物DNA。
而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過(guò)程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達(dá)。因此，在基因工程中，cDNA文庫(kù)法是從真核生物細(xì)胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”，又叫“散彈射擊法”。這種方法有如用獵槍發(fā)射的散彈打鳥，無(wú)論哪一顆彈粒擊中目標(biāo)，都能把鳥打下來(lái)。
鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內(nèi)切酶）將供體細(xì)胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過(guò)運(yùn)載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細(xì)胞中大量復(fù)制（在遺傳學(xué)中叫做擴(kuò)增），從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來(lái)。如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用“鳥槍法”獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性。人工合成1.（主要是序列已知的基因）。
主要是通過(guò)DNA自動(dòng)合成儀，通過(guò)固相亞磷酸酰胺法合成，具體過(guò)程可以網(wǎng)上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個(gè)一個(gè)連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對(duì)于大的基因一般是先用化學(xué)合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍，使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研 究和檢測(cè)鑒定。
過(guò)去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑。
4.獲得目的基因的方法
化學(xué)合成法（主要是序列已知的基因）。主要是通過(guò)DNA自動(dòng)合成儀，通過(guò)固相亞磷酸酰胺法合成，具體過(guò)程可以網(wǎng)上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個(gè)一個(gè)連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對(duì)于大的基因一般是先用化學(xué)合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2、基因組文庫(kù)法（就是原教材中的用限制性內(nèi)切酶直接獲取法）。利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫(kù)的一般操作程序如下：① 選用特定限制性內(nèi)切酶， DNA進(jìn)行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當(dāng)處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進(jìn)行體外重組。④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個(gè)DNA的重組DNA群體，即文庫(kù)。
3、cDNA文庫(kù)法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫(kù)，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫(kù)法來(lái)獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫(kù)比其cDNA文庫(kù)大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達(dá)真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過(guò)程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達(dá)。因此，在基因工程中，cDNA文庫(kù)法是從真核生物細(xì)胞中分離目的基因的常用方法。
