飼料抗生素檢測方法(目前抗生素的含量測定多用什么方法)
1.目前抗生素的含量測定多用什么方法
牛奶中抗生素殘留的幾種常用檢測方法 隨著(zhù)奶牛飼養業(yè)的發(fā)展，抗生素在預防和治療奶牛疾病方面得到廣泛的應用。
生鮮牛奶中抗生素的來(lái)源主要是：第一，治療泌乳期病牛時(shí)使用的抗生素會(huì )從奶牛體內移行到乳腺殘留進(jìn)入牛奶中，資料表明治療后的奶牛，其擠出的牛奶5天內都有抗生素殘留；其二，為了預防奶牛疾病并提高產(chǎn)量，在奶牛飼料中添加抗生素也會(huì )造成牛奶中抗生素的殘留；第三，由于牧場(chǎng)管理不善，擠奶、儲奶沒(méi)有嚴格的衛生制度和配套的設施，人為添加或造成牛奶抗生素的污染。牛奶中含有抗生素，不僅對人的健康造成很大的危害，而且對乳品加工企業(yè)帶來(lái)經(jīng)濟損失（因無(wú)法生成酸奶和奶酪）。
因此必須嚴格控制牛奶中抗生素殘留，除了要做好科學(xué)飼養、精心管理；正確擠奶和預防疾病外，還要規范抗生素的使用，按國標中有關(guān)規定，用藥后的奶牛5天后所產(chǎn)的牛奶才可作為原料乳，并且要檢測其殘留。世界糧農組織（FAO）、世界衛生組織（WHO）、歐盟（EC）及美國的食品和藥品管理局（FDA）等對食品中抗生素最大殘留量都有明確的規定，我國也有鮮奶中抗生素殘留量檢驗標準（GB4689.27—94）。
目前，鮮奶中抗生素殘留的檢測方法大致分為三類(lèi)：生物測定法（微生物測定法、放射受體測定法）、免疫法（放射免疫法、熒光免疫法、酶聯(lián)免疫法）、理化分析法（波譜法、色譜及聯(lián)用技術(shù)）。下面介紹幾種常用的牛奶中抗生素殘留檢測方法。
TTC法TTC法是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗標準（GB4689.27—94）的檢測法，屬生物檢測法。其測定原理基于抗生素對微生物的抑制作用。
如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種（嗜熱鏈球菌）經(jīng)培育2.5~3小時(shí)后，加入TTC指示劑（三苯基四氮唑）不發(fā)生還原反應，所以樣品呈無(wú)色狀態(tài)；如果牛奶中不含抗生素，則樣品呈紅色.這樣實(shí)驗后樣品顏色不變的為陽(yáng)性，樣品染成紅色的為陰性。TTC法的具體操作步驟：1.菌液制備：將單菌種（嗜熱鏈球菌）以脫脂乳為培養基，在36±1℃培養箱中培養15小時(shí)后，再以脫脂乳以至于1:1稀釋待用；2.取待檢樣液9mL，在80℃水浴加熱5分鐘后冷卻到37℃以下，加活菌液1mL，在36℃±1℃水浴2小時(shí)，加入4%的TTC指示劑0.3mL, 36℃±1℃水浴培養30分鐘；3.若樣液顏色不變?yōu)殛?yáng)性，呈紅色為陰性；若陽(yáng)性的樣液，再置于水浴中培養30分鐘，不顯色的為陽(yáng)性，呈紅色為陰性.TTC法測定各種抗生素的靈敏度為：青霉素：4ppb，鏈霉素：500ppb，慶大霉素：400ppb，卡那霉素：5000ppb.它具有費用低，易開(kāi)展的優(yōu)點(diǎn)；缺點(diǎn)是耗時(shí)長(cháng)，要求操作人員需有一定專(zhuān)業(yè)知識且實(shí)驗過(guò)程中菌液的制備、水浴過(guò)程控制都要求嚴格遵守操作規程，否則易出現假陽(yáng)性，以致出現檢驗結果的不穩定性。
Delvotest? sp法（戴爾沃檢測法）該法最早在香港傳到廣東的，其使用是基于20世紀80年代初香港要求廣東出口的生奶必須“無(wú)抗”且要求采用Delvotest法檢測。該方法也是生物測定法，其試劑是由荷蘭DSM公司生產(chǎn)并由AOAC認證。
原理是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養2.5~3小時(shí)后會(huì )產(chǎn)酸，酸引起指示劑BCP（溴甲酚紫）變?yōu)辄S色；若牛奶樣品中不含抗生素，培養后樣品呈黃色，如樣品中含有抗生素， 嗜熱芽胞菌生長(cháng)受到抑制而無(wú)法產(chǎn)酸，指示劑將不變色.Delvotest? sp 法的操作步驟：1.以無(wú)菌操作將一片營(yíng)養藥片夾放入小試管內；2.用微量移液管將0.1mL牛奶樣品注入小試管內；3.把小試管放入已預熱至64℃的水浴箱或恒溫器中培養；4）.定時(shí)3小時(shí)取出觀(guān)察顏色變化.如果底部2/3的固體介質(zhì)是黃色，則為陰性， 如果底部2/3的固體介質(zhì)是紫色，則為陽(yáng)性.Delvotest? sp 法具有廣譜性，可檢測到？-內酰胺類(lèi)抗生素在內的更多抗生素，如磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內酯類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、氯霉素等，其中對青霉素和磺胺類(lèi)抗生素特別靈敏. 其靈敏度為：青霉素：3ppb，鏈霉素：300ppb，慶大霉素：400ppb，卡那霉素：2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便，嚴格實(shí)用，容易判斷，結果可靠，費用適中等優(yōu)點(diǎn)；但也易出現假陽(yáng)性，實(shí)驗證明：當牛奶樣品中添加微生物防腐劑（如乳酸鏈球菌素—Nisn）或樣品中有足夠的洗滌劑殘留時(shí)，便可影響嗜熱芽胞菌生長(cháng)而使實(shí)驗為陽(yáng)性。
Snap？法該方法是酶聯(lián)免疫法，由美國IDEXX公司生產(chǎn)其檢測分析儀及其試劑盒，均獲得AOAC認證，它利用了竟爭酶聯(lián)免疫技術(shù)。其基本原理是用特異性抗體將固相載體激活，加入含待測抗原的溶液和一定量的酶標記抗原在45℃±5℃共同保溫，使樣品內的抗生素與內置抗生素標志物竟爭與固定的抗體結合，然后進(jìn)行洗滌和顯色，內置抗生素標志物與固定的抗體結合形成的復合體，通過(guò)酶的作用分解可形成有色物質(zhì)，通過(guò)測定色度并與參照物對照，就可以確定結果是陽(yáng)性或陰性。
Snap？法操作步驟：1.加入乳樣于樣品管中，搖勻，加熱樣品和檢測板5分鐘；2.加入乳樣于樣品孔中，當激活圓環(huán)開(kāi)始退卻時(shí)，按Snap鍵；3.反應4分鐘，由Snap？讀數儀讀取并打印結果.檢測讀數小于1.05時(shí)判為陰性，大于1.05時(shí)判為陽(yáng)性.Snap？法是一種將酶化學(xué)反應的敏感性和抗原抗體免疫反應的特異性相結合的方法，其敏。
2.飼料的檢測項目有哪些
飼料檢測項目一覽表 常規檢測項目氨基酸檢測□ 粗蛋白 □ 18種水解蛋白質(zhì)氨基酸的測定□ 粗脂肪 維生素檢測項目□ 粗纖維 □ 維生素A□ 水分 □ 維生素E□ 鈣 □ 維生素D3□ 總磷 □ 維生素B1□ 粗灰分 □ 維生素B2□ 水溶性氯化物 □ 總抗壞血酸 □ 胃蛋白酶消化率 □ 維生素B6□ 熱量 □ 維生素B12微量元素檢測項目□ 煙酸 □ 鉀 □ 泛酸 □ 鈉 □ 葉酸 □ 鈣 □ d-生物素 □ 鎂 □ 銅 實(shí)驗動(dòng)物 配合飼料檢測項目□ 鐵 □ 常規營(yíng)養成分的測定 □ 錳 □ 氨基酸的測定 □ 鋅 □ 維生素的測定 □ 硒 □ 礦物質(zhì)和微量元素的測定。
3.豬飼料國家允許添加的抗生素有哪些
多肽類(lèi)抗生素如：硫酸粘桿菌素 恩拉霉素 維吉尼霉素 阿伏霉素 硫肽菌素 。
大環(huán)內酯類(lèi)抗生素如： 泰樂(lè )菌素 北里霉素 螺旋霉素 紅霉素 竹桃霉素。
聚醚類(lèi)抗生素如：拉沙洛西鈉 莫能霉素 鹽霉素鈉。
四環(huán)素類(lèi)抗生素：如土霉素 金霉素。
合成抗生素及其相關(guān)藥物： 胂制劑 銅制劑 鋅制劑 喹乙醇 卡巴氧 痢特靈 磺胺藥
多糖類(lèi)抗生素：黃霉素
其它幾種抗生素促生長(cháng)劑：阿布拉霉素 卑霉素 桿菌肽鋅
4.根據檢測原理不同,食品中抗生素殘留的檢測方法可分為哪幾種
目前應用于食品中抗生素殘留的檢測方法依據檢測原理的不同主要有：微生物檢測法、理化檢測法和免疫分析法。
1、微生物檢測法
抗生素對微生物機能和代謝具有抑制作用，利用該性質(zhì)可實(shí)現對樣品中抗生素殘留的定性或定量分析，而且檢測費用較低，但是花費時(shí)間長(cháng)、特異性差、靈敏度低、對微量殘留檢測易產(chǎn)生誤差。
2、理化檢測法
理化檢測法是一種根據抗生素的分子理化性質(zhì)對其進(jìn)行分離和檢測的方法，如色譜法（高效液相色譜法、氣相色譜法、質(zhì)譜法等）、電泳法（毛細管電泳法等），這種方法檢測靈敏度較高、結果穩定、重復性好、精確可靠，是目前食品中抗生素殘留測定的確證檢測方法，但是為了減少背景干擾樣品前處理方法復雜，分析速度慢，分析儀器昂貴，需要專(zhuān)業(yè)的操作人員等缺點(diǎn)限制了該方法的普遍推廣應用。
3、免疫分析法
免疫分析法是以抗原與抗體的特異性結合為基礎的分析技術(shù)，雖然成本較其他方法高，但是具有操作簡(jiǎn)單、取樣量少、前處理簡(jiǎn)單、檢測快速、特異性強、靈敏度高、可同時(shí)檢測樣品中多種抗生素殘留、可實(shí)現大規模的檢測及容易推廣普及等優(yōu)點(diǎn)，是一種理想的抗生素殘留的檢測方法。其中，基于量子點(diǎn)（quantum qots,QDs）的熒光免疫分析方法應用更為廣泛。QDs作為熒光標記相對于傳統熒光染料有如下優(yōu)點(diǎn)：熒光強度高，抗光漂白性能好，斯托克斯位移較大，可通過(guò)控制粒徑改變熒光發(fā)射波長(cháng)，能夠實(shí)現“一元激發(fā)多元發(fā)射”等。這些優(yōu)勢使得QDs在熒光標記中的應用日益廣泛。用QDs對抗體進(jìn)行標記，通過(guò)抗原直接包被法或間接競爭法兩種免疫方法實(shí)現食品中抗生素殘留的檢測。Ding Shuangyang等，直接獲得商品化的QD655-羊抗鼠IgG，然后通過(guò)羊抗鼠IgG與抗體的作用得到QDs-抗體探針，分別實(shí)現了對磺胺二甲嘧啶和恩諾沙星在雞肉組織中的檢測。除此之外，由于QDs的能夠實(shí)現“一元激發(fā)多元發(fā)射”的熒光特性，還可以用于多種抗生素的同時(shí)檢測。Peng Chifang等采用五種不同發(fā)射波長(cháng)的QDs分別標記五種不同的抗體，通過(guò)間接競爭熒光免疫分析法（ic-FLISA）實(shí)現了同一樣品中五種抗生素殘留的同時(shí)檢測。Zhu Kui等[7]用兩種發(fā)射波長(cháng)的QDs，通過(guò)直接競爭（QDs標記一抗）和間接競爭（QDs-二抗-一抗或QDs-親和素-生物素-一抗）兩種方法實(shí)現對磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)抗生素在牛奶中殘留的檢測，并在同一牛奶樣品中與酶聯(lián)免疫分析（ELISA）聯(lián)用，用辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記，實(shí)現三聚氰胺的同時(shí)檢測（HRP-二抗-一抗）。采用以量子點(diǎn)為標記的熒光免疫法檢測食品中的抗生素殘留是一種高效、準確、簡(jiǎn)單、快速的檢測方法。
5.飼料廠(chǎng)如何鑒別各種藥物的品質(zhì),抗菌能力
藥敏試驗的建議實(shí)在是離譜了。
很多學(xué)校都沒(méi)有條件做，不說(shuō)設備，就是定型的菌種你都找不全。 那只是幫助分析某種藥物，對指定細菌的作用。
實(shí)際的生產(chǎn)，只要抗生素用上能殺菌，成本合適，無(wú)不良副作用就好了呀。 一般而言，哪怕是美國的usp和歐洲的ep標準，包括我們國家的藥典。
對于藥物的評價(jià)除了一般的指標（失水重、灼燒殘渣、重金屬等） 對于含量主要兩個(gè)方法： 1 HPLC，這個(gè)不需要說(shuō)了，比較常見(jiàn)的方法，只要有標準品，掌握操作方法，應該還好的。 2 生測法，用藥典規定的菌種檢驗藥物的抗菌力，得到的是“效價(jià)”，一般是日本人發(fā)現得抗生素用的比較多。
硫酸粘桿菌素、硫酸新霉素等等~~~ 我們和客戶(hù)的交流中，很多客戶(hù)只認HPLC也很讓人郁悶。畢竟，個(gè)人覺(jué)得，生測法是反映實(shí)際效果的。
即便藥典不是很完美，可如果藥典的方法都被否定了，真的不知道還有什么標準可以參考。 另外，很多朋友質(zhì)疑國內的抗生素廠(chǎng)家。
這點(diǎn)完全可以放心，目前大家能用到的抗生素，都是可以國產(chǎn)化的。 中國的仿造能力可是世界一流，這個(gè)你不承認？ 但凡中國能生產(chǎn)的，基本國外公司全掛掉。
這個(gè)你也承認吧？ 建議大家選擇知名大廠(chǎng)，比如升華拜克。 知名的抗生素大廠(chǎng)，都是出口世界各地的，經(jīng)過(guò)世界最嚴格的質(zhì)量體系約束，也備受世界大公司審查。
他們的質(zhì)量是完全可以放心的。
