植物組織培養的過(guò)程,植物組織培養的基本過(guò)程。謝謝
植物細胞組織培養
一．實(shí)驗目的
植物細胞和組織培養的技術(shù)性強，要求無(wú)菌操作，通過(guò)本實(shí)驗可初步掌握常規的組織培養技術(shù)，加深對無(wú)菌操作的了解。
二．實(shí)驗原理
植物的全能性：植物體的任何一個(gè)細胞都具有生長(cháng)分化成為一個(gè)完整植株的能力，稱(chēng)為植物的全能性。
植物組織培養就是利用植物的全能性進(jìn)行離體無(wú)菌植物培養的一門(mén)技術(shù)。植物組織培養按其原始意義，就是指愈傷組織培養。但發(fā)展至今，其范圍日益擴大，已包括植物和它的離體器官、組織、細胞和原生質(zhì)體的離體無(wú)菌培養。因此，擁有幾種不同水平的培養技術(shù)，即整體的、器官的、組織的、細胞的和原生質(zhì)的培養技術(shù)。它們的涵義是：
1．植株培養。指以具備完整植株形態(tài)的材料（如幼苗和較大的植株）外植體的無(wú)菌培養。
2． 胚胎培養。指以從胚珠中分離出來(lái)的成熟或未成熟胚為外植體的離體無(wú)菌培養。
3． 器官培養。指以植物的根，莖，葉，花，果等器官為外植體的離體無(wú)菌培養，如根的根尖和切段，莖的莖尖，莖節和切段，葉的葉原基，葉片，葉柄，葉鞘和子葉，花器的花瓣，雄蕊（花藥，花絲），胚珠，子房，果實(shí)等的離體無(wú)菌培養。
4． 組織培養。指以分離出植物各部位的組織（如分生組織，形成層，木質(zhì)部，韌皮部，表皮，皮層，胚乳組織，薄壁組織，髓部等），或已誘導的愈傷組織為外植體的離體無(wú)菌培養。這是狹義的組織培養。
5． 細胞培養。指以單個(gè)的游離細胞（如用果酸酶從組織中分離的體細胞，或花粉細胞，卵細胞）為接種體的離體無(wú)菌培養。
6． 原生質(zhì)體培養。指以除去細胞壁的原生質(zhì)體為外植體的離體無(wú)菌培養。
本實(shí)驗選擇煙草和豌豆為材料，煙草（Nicotiana）屬茄科植物，是重要的工業(yè)原料，也是植物組織培養的四大典型實(shí)驗植物（煙草、矮牽牛、胡蘿卜、蕓苔）中重要的一種，它的研究的最為廣泛，也始終領(lǐng)先于其他的植物材料，目前，66個(gè)煙草品種中，再生成植株的有16個(gè)種，通過(guò)花藥培養再生成花粉植株的有12個(gè)種，通過(guò)原生質(zhì)體培養再生成植株的有20個(gè)種，通過(guò)煙草的種內和種間原生質(zhì)體融合再生成雜種的植物分別為3個(gè)和12個(gè)種。豌豆（Pisum sativum）屬豆科植物，是糧食、飼料和重要的蔬菜作物，也是遺傳學(xué)家和植物生理學(xué)家感興趣和樂(lè )于采用的實(shí)驗植物，豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體，皆可形成愈傷組織，其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養可包括小至十幾微米的莖尖分生組織（生長(cháng)點(diǎn)）和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養。在實(shí)踐應用上，常采用生長(cháng)點(diǎn)的培養使患病植物去病毒，以達到挽救優(yōu)良品種，提高產(chǎn)量和質(zhì)量之目的。
三．實(shí)驗材料
儀器設備
1．酒精燈、100ml三角燒瓶，9厘米培養皿植物組織培養的過(guò)程；
2．鑷子、剪刀、解剖針；
3．雙筒解剖顯微鏡；
4．光照培養箱或溫室；
材料和試劑
1．材料 煙草無(wú)菌苗、豌豆幼苗。
2．試劑
（1）MS培養基，植物激素：NAA、6-BA等；
（2）飽和漂白粉液（次氯酸鈉）；
（3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；
（4）無(wú)菌水
四．實(shí)驗步驟
1．煙草無(wú)菌苗的快速切繁—繼代培養：（要求完全無(wú)菌操作）
每組一瓶煙草無(wú)菌苗，請細心操作，以免污染。
（1） 在實(shí)驗臺上，點(diǎn)著(zhù)酒精燈，將雙手用酒精棉球擦拭消毒，打開(kāi)生長(cháng)好無(wú)菌煙草苗的三角瓶，三角瓶的瓶口使用前后需在酒精燈外焰上燒過(guò)滅菌。
（2） 用滅菌的鑷子輕輕捏出1株幼苗，用滅菌的剪刀將無(wú)菌苗剪成0.5-1厘米的小段，要求每段至少包含一個(gè)生長(cháng)點(diǎn)，直接剪入盛有MS培養基的三角瓶中，每一個(gè)切段必須直接接觸培養基，三角瓶口重新燒過(guò)滅菌，并重新封好口。
（3） 在光照培養箱中15~25℃，16小時(shí)光照條件下培養4周，可長(cháng)成完整植株，能用于田間移栽。
2．豌豆苗的莖尖培養
⑴ 取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株，簡(jiǎn)取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無(wú)菌）用無(wú)菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養皿中。
⑵ 在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝去幼葉露出生長(cháng)錐，用滅菌的解剖針挑取帶著(zhù)兩至三個(gè)葉原基的生長(cháng)錐。
⑶ 將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L 6-芐基腺嘌呤（6-BA）的培養基上誘導愈傷組織形成，用封口膜將培養皿封好。
[4]在恒溫培養箱中，26℃下,培養六周，形成愈傷組織，經(jīng)繼代后，可用于生根培養。
