微生物安全知識(微生物實(shí)驗室的安全操作規程)

1.微生物實(shí)驗室的安全操作規程

抄的哦1 實(shí)驗室安全 1.1 微生物實(shí)驗室的生物安全性 1.2 科室安全文檔 （a）生物危害防護：實(shí)際操作規程見(jiàn)（《實(shí)驗室生物安全通用要求》，中華人民共和國國家標準GB19489-2004。

2004-01-05發(fā)布，2004-10-01實(shí)施。） （b）實(shí)驗室安全：原則和措施見(jiàn)（《微生物和生物醫學(xué)實(shí)驗室生物安全通用準則》，中華人民共和國衛生行業(yè)標準WS 233-2002。

2002-12-03發(fā)布，2003-08-01實(shí)施。） 1.3 應用：以上的操作規程應用于微生物科室的所有部門(mén)。

工作人員或訪(fǎng)問(wèn)人員必須遵守各項規定。 1.4 關(guān)于新規定或現行規定的修改案：任何新規定或現行規定的修改案必須通知負責科室安全的人員及相關(guān)人員，他們將建議科室主任考慮實(shí)施。

1.5 生物性危害 1.5.1 與各種操作有關(guān)的生物危害水平取決于： a.處理的傳染性物質(zhì)的本身：按照傳染性物質(zhì)對個(gè)人和社區和潛在危險性以及經(jīng)空氣傳播的可能性，其劃分成不同等級。所采用的等級劃分詳見(jiàn)”《實(shí)驗室生物安全通用要求》”；原則和措施（見(jiàn)《微生物和生物醫學(xué)實(shí)驗室生物安全通用準則》）。

b.使用的設備和設施： 處理不同等級的傳染性物質(zhì)的要求在”實(shí)驗室安全”中已規定。這些符合要求的設備都要承擔重要臨床工作，科室負責人必須保證中應污染物水平。

c.培訓，特別是員工的安全性培訓和安全性經(jīng)驗積累。所有員工應該接受一定訓練，能安全處理任何實(shí)驗室可能碰到的物質(zhì)，避免將實(shí)驗不能處理或規定之外的傳染性物質(zhì)暴露在實(shí)驗室，即使暴露事故在實(shí)驗室，即使暴露事故發(fā)生也要會(huì )正確處理。

1.5.2 傳染性物質(zhì)的分類(lèi) 1.5.2.1分類(lèi)系統 生物危害防護：〔見(jiàn)1.2 (a)〕，根據生物因子對個(gè)體和群體的危害程度將其分為4級，危害等級Ⅳ最具危害性。 1.5.2.2危險群/生物安全水平：1-4 a.危險群/生物安全水平：1——對健康成人無(wú)致病性，對社區無(wú)危害性。

通常一般微生物操作就足夠，不需特殊安全設備，工作的附近要有洗手設施。培養基上包含未鑒定物，因此，妥善處理對各級安全水平都至著(zhù)重要。

b.危險群/生物安全水平：2——人類(lèi)疾病相關(guān)物質(zhì)，這種物質(zhì)對實(shí)驗室工作人員有中度危險，并具有一定程度社區危險性。醫院微生物室所涉及的絕大多數物質(zhì)屬此安全水平，生物危害警告應張貼，并且限制接近，應用醒目標語(yǔ)，若是能產(chǎn)生空氣傳播或飛濺的I,II類(lèi)物質(zhì)都就使用相就的操作臺。

實(shí)驗室就提供類(lèi)似防護衣和手套，眼罩尤其是配戴隱形眼鏡者，也應提供類(lèi)似安全水平的洗手設施，并且臨近工作區也應有高壓滅菌裝置。所有廢物和反復使用設備的去污染應有特定的程序。

c.危險群/生物安全水平：3——人類(lèi)疾病相關(guān)物質(zhì)，具有潛在空氣傳播性，能引起嚴重，致命疾病，對實(shí)驗室工作人員高度危險，并具有一定程度社區危險性。所有含有或懷疑含有生物案的標本必須標以”小心污染”標簽，并且同時(shí)標于盛放標本容器和申清單。

然而作為預防保護還不足夠。應對所有血液，體液，分離的人體組織等有普通防護意識，它們都應視作傳染源。

在此生物安全級，實(shí)驗室應控制對其接近。凡涉及該類(lèi)物質(zhì)都應使用I或II類(lèi)工作臺操作，也可以遵循II級操作注意事項，對所有廢物進(jìn)行去污染處理，包括工作服和重復使用設備。

d.危險群/生物安全水平：4——對個(gè)人的危險如生物安全3級，但對社區有高度危險性。這些傳染性物質(zhì)包括： 蜱源性腦炎病毒 支里半亞-剛果牛血熱病毒 Marburg Virus 艾波拉病毒 Lagsa fever Virus Junin HF Virus Machupo HF Virus Guanaruto HF Virus Herpesvirus simiae (B Virus) 1.6 以下預防措施，所有實(shí)驗工作人員必須遵守： 1.6.1 工作服 a.所有實(shí)驗室成員在工作期間必須始終穿著(zhù)所提供的工作服。

離開(kāi)實(shí)驗室時(shí)，工作服須掛在指定地方，不得在實(shí)驗室外冼工作服。 b.在處理含有或懷疑含有生物安全3級物質(zhì)的標本時(shí)，必須在工作服外穿隔離衣。

c.在生物安全操作臺內處理標本和培養基時(shí)，必須戴手套。 1.6.2 洗手池 洗手池須供應洗潔劑和紙巾。

1.6.3 洗手 所有工作人員在離開(kāi)工作區必須洗手，并且要先脫去工作服和手套。 1.6.4 食物，飲水，吸煙，化妝品 食物和飲料不允許帶入任何處理標本的房間.不允許在處理標本的任何地方吸煙.不允許在處理標本的任何地方使用化妝品。

1.6.5 傷口和擦傷 手上的傷口和擦傷必須覆蓋保護物。 1.6.6 個(gè)人衣物 個(gè)人衣物不允許帶入實(shí)驗室，并且必須保存在帶鎖的柜子里。

1.6.7 口吸移液管 這是禁用的。要求使用機械移液裝置。

1.7 常規預防措施應用于所有血液、體液、組織標本的操作中： 1> 無(wú)論何時(shí)都應盡可能避免使用注射器，針頭或其它銳器。 2> 使用過(guò)的針頭和一次性切割器必須丟入專(zhuān)門(mén)的帶有蓋子和桶內，以備安全處理、防止容器過(guò)滿(mǎn)盛裝。

3> 使用過(guò)的針頭不許重新使用或再用手操作。 4> 打爛的玻璃必須放入堅硬的容器（不要用手），然后再放入黑色垃圾袋，如果是污染的，使用黃色垃圾袋。

5> 在接觸具有潛在性傳染性標本培養基、組織，必戴保護性手套，防止皮膚直接接觸。如果手套有可見(jiàn)的污染，必須先除去污染，再更換。

手上有皮炎或傷口的工作人員的需要間接接觸傳染性物質(zhì)的人員應戴保護性手套。 6> 在處理完標本、結束工作，甚至在上述規定帶手套時(shí)。

2.微生物知識

美國藥典（USP）中規定：“將微生物接種至一新鮮培養基上/內，每萌發(fā)一次即稱(chēng)為一代，因此，當原始菌種復溶并轉至一培養基內生長(cháng)，即認為已傳代一次，” 并規定“菌種的傳代次數（自原始菌種凍干粉起）不得超過(guò)5代”。我國的GMP認證中也如此要求，并且中國藥典2005年版藥典也已做出“菌種的傳代次數（自原始菌種凍干粉起）不得超過(guò)5代”這個(gè)明確的規定。

實(shí)驗室菌種的傳代保藏過(guò)程

1. 按菌種說(shuō)明書(shū)要求復溶菌粉，轉種于適當的增菌培養基內（G1），復壯后轉接至平板上，并于適當溫度下培養適當時(shí)間，分離出單個(gè)純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 菌種鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時(shí)挑取純菌落轉接斜面菌種作為工作用菌種。此時(shí)，保藏菌種為第2代，但工作用菌種則為第三代。

3. 將第2代菌種管冷凍保存，將工作用菌種于適當溫度下培養適當時(shí)間后可用于試驗。

4. 取一支冷凍保存的G2代菌種轉種于平板和斜面培養基上，平板上的菌種制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養基經(jīng)適當溫度下培養適當時(shí)間后用作工作用菌種（W3）。

5. 將第三代菌種（G3）冷凍或低溫保存，將生長(cháng)、轉種后的G2菌種經(jīng)滅菌處理后丟棄。

6. 當工作用菌種代數小于5時(shí)，可直接用上一代工作用菌種轉接下一代工作用菌種，如W3可直接轉接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉為W5為止，需重新開(kāi)啟安瓿，再重復上述操作程序、保藏和使用菌種。

以上方法中，菌種被分為兩類(lèi)。傳代用菌種和工作用菌種，傳代用菌種用于甘油冷凍管法保藏，工作用菌種用斜面低溫保藏法保藏。

實(shí)驗證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、對厭氧菌、真菌和芽孢類(lèi)細菌則需應用其它方法。

3.生物安全防護知識培訓的基本內容有哪些

學(xué)員對象：各大醫院、研究中心、實(shí)驗室從事動(dòng)物實(shí)驗的科研人員、工作人員、管理人員等。

課程收益：實(shí)驗動(dòng)物相關(guān)實(shí)驗室既涵蓋了一般實(shí)驗室的生物安全要求，同時(shí)也使得實(shí)驗室生物安全變得更加復雜和多變，人員要求更加嚴格，生物安全事件也相對較多。因此，本課程將重點(diǎn)介紹一些動(dòng)物實(shí)驗相關(guān)實(shí)驗室的生物安全知識。

課程內容： 【內訓課程編號】N101077 【培訓對象】各大醫院、研究中心、實(shí)驗室從事動(dòng)物實(shí)驗的科研人員、工作人員、管理人員等。【培訓背景】 實(shí)驗動(dòng)物相關(guān)實(shí)驗室既涵蓋了一般實(shí)驗室的生物安全要求，同時(shí)也使得實(shí)驗室生物安全變得更加復雜和多變，人員要求更加嚴格，生物安全事件也相對較多。

因此，本課程將重點(diǎn)介紹一些動(dòng)物實(shí)驗相關(guān)實(shí)驗室的生物安全知識。【培訓大綱】 一、你有實(shí)驗室生物安全意識嗎？ ●實(shí)驗室生物安全是每個(gè)實(shí)驗室人員應該高度重視的問(wèn)題，實(shí)驗的每個(gè)環(huán)節都會(huì )有潛在風(fēng)險。

大家并沒(méi)有嚴格、專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗室風(fēng)險識別和風(fēng)險控制的意識和技能，實(shí)驗室環(huán)境也沒(méi)能形成安全、清潔的文化氛圍，每天都會(huì )有許許多多程度不同的生物安全隱患和風(fēng)險。 ●動(dòng)物存在哪些危害，怎樣防護等等問(wèn)題，都需要我們認真思考，至少先要有良好的安全意識，然后形成實(shí)驗室安全操作規范，通常國際上稱(chēng)為SOP，大家在實(shí)驗之前，應該了解清楚，才能及時(shí)應用。

二、你做好動(dòng)物實(shí)驗的準備了么？在動(dòng)手之前，你認真思考了以下問(wèn)題嗎？1、你真的了解實(shí)驗動(dòng)物么？ ●實(shí)驗動(dòng)物具有兩大特點(diǎn)：一是為人類(lèi)需要改變自己，似像非像原種動(dòng)物，成為“病態(tài)異類(lèi)”；二是由于遺傳改變，原有抵抗病原的能力呈現不同程度下降，對病原譜系發(fā)生改變，更易得病。 ●實(shí)驗動(dòng)物、分泌物、排泄物、樣品、器官、尸體等控制、操作不當會(huì )變成病原污染的擴大器，造成大范圍傳播，因此，了解實(shí)驗動(dòng)物特性，就知道了動(dòng)物實(shí)驗首先要做好思想準備，防備于未然。

2、你具備動(dòng)物實(shí)驗能力嗎？ ●動(dòng)物實(shí)驗的能力，包括動(dòng)物飼養能力、對動(dòng)物認知能力、操作能力、信息采集能力、分析能力、關(guān)護能力和生物安全防護能力。具備了這些能力，才能完成良好的動(dòng)物實(shí)驗，同時(shí)保證實(shí)驗中的生物安全。

●動(dòng)物源人獸共患病，如出血熱、結核病、狂犬病、菌痢、寄生蟲(chóng)等疾病更是直接威脅我們健康。實(shí)驗既要了解病原的危害，也要了解動(dòng)物感染后的危害，和可能的生物安全風(fēng)險，操作中要提高能力，降低風(fēng)險。

●動(dòng)物活體檢測、外科手術(shù)、活體采樣、解剖取材等技能更是要求人員能夠熟練掌握。必須經(jīng)過(guò)嚴格培訓，才能實(shí)際應用。

能力，是安全的保證。3、你知道動(dòng)物實(shí)驗要經(jīng)過(guò)審查批準么？ ●動(dòng)物實(shí)驗方案審查的內容應該包括： 實(shí)驗人員是否符合操作要求；設施設備是否符合動(dòng)物要求；飼料、墊料、飲水是否符合動(dòng)物要求；動(dòng)物運輸是否符合要求；實(shí)驗方案是否符合動(dòng)物福利要求；動(dòng)物處置是否符合倫理規范；動(dòng)物處死是否符合安樂(lè )死原則；動(dòng)物尸體處理是否符合環(huán)保要求等等方面。

這些方面，都要有生物安全作為保障。動(dòng)物實(shí)驗福利、倫理、生物安全審查中應注意的問(wèn)題非常多，主要人員培訓情況； ●動(dòng)物實(shí)驗人員必須經(jīng)過(guò)操作培訓，包括：動(dòng)物基本知識、動(dòng)物操作、麻醉方法、手術(shù)方法、給藥方法、取材方法、解剖方法、生物安全防護等各種操作，最好持有專(zhuān)業(yè)培訓證書(shū)。

三、你具備動(dòng)物實(shí)驗生物安全防護能力嗎？1、你了解動(dòng)物實(shí)驗可能的生物危害嗎？ ●動(dòng)物實(shí)驗可能帶來(lái)的危害主要有：一是動(dòng)物咬傷、抓傷等直接危害；二是動(dòng)物攜帶人獸共患病病原，在操作過(guò)程中通過(guò)空氣、分泌物、直接接觸等途徑感染人類(lèi)；三是人類(lèi)高致病性病原感染動(dòng)物實(shí)驗，從動(dòng)物或環(huán)境再感染人。 ●最常見(jiàn)的情況是，實(shí)驗動(dòng)物沒(méi)有良好的設施、設備作保障，動(dòng)物污染后處理不當，造成環(huán)境、動(dòng)物、人員的生物危害。

2、你能識別造成動(dòng)物生物安全風(fēng)險的行為嗎？ ●實(shí)驗室活動(dòng)，包括動(dòng)物實(shí)驗的每個(gè)環(huán)節都會(huì )存在風(fēng)險。動(dòng)物實(shí)驗操作中除了我們熟悉的“3R”外，還有一個(gè)最重要的R，就是responsibility，是指責任、責任心。

關(guān)護動(dòng)物，使動(dòng)物處于相對安靜狀態(tài)，減少動(dòng)物煩躁不安、過(guò)激行為、減少物質(zhì)釋放（如大動(dòng)物激惹后呼吸增加、激烈活動(dòng)時(shí)揚塵），均可降低產(chǎn)生風(fēng)險。 ●需要識別的動(dòng)物相關(guān)風(fēng)險（10項）3、你知道生物安全管理、風(fēng)險評估和風(fēng)險控制嗎？ ●生物安全風(fēng)險評估和風(fēng)險控制通俗地講就是要了解實(shí)驗可能的各種風(fēng)險，萬(wàn)一出現了風(fēng)險，馬上采取相應的應對控制手段。

●管理：國家法規、條例、標準等。國家有專(zhuān)門(mén)的要求，病原按危害程度被分為1-4類(lèi)，1-2類(lèi)稱(chēng)為高致病性病原。

所有病原都應該在1-4級不同等級生物安全實(shí)驗室中進(jìn)行，并且事先做好生物安全風(fēng)險評估和風(fēng)險控制，嚴格操作，以確保安全。應根據危害程度分類(lèi)，對特定的病原微生物采取相應級別的生物安全防護水平，減少人員暴露的危險和使環(huán)境污染降到最低限度。

●動(dòng)物實(shí)驗涉及的所有方面，包括動(dòng)物、病原、試劑、操作等都應預先知道，并識別可能的危害。根據危害程度，提出風(fēng)險評估，采取風(fēng)險控制措施，是生物安全的核心工作。

●動(dòng)物的風(fēng)險評估應包括：動(dòng)物等級、大小、特性、飼養、操。

4.微生物小知識

20

世紀以來(lái)，生物化學(xué)和生物物理學(xué)向微生物學(xué)滲透，再加上電子顯微鏡的發(fā)明和同

位素示蹤原子的應用，推動(dòng)了微生物學(xué)向生物化學(xué)階段的發(fā)展。

1897

年德國學(xué)者畢希納發(fā)

現酵母菌的無(wú)細胞提取液能與酵母一樣具有發(fā)酵糖液產(chǎn)生乙醇的作用，

從而認識了酵母菌酒

精發(fā)酵的酶促過(guò)程，將微生物生命活動(dòng)與酶化學(xué)結合起來(lái)。

諾伊貝格等人對酵母菌生理的研究和對酒精發(fā)酵中間產(chǎn)物的分析，

克勒伊沃對微生物代

謝的研究以及他所開(kāi)拓的比較生物化學(xué)的研究方向，

其他許多人以大腸桿菌為材料所進(jìn)行的

一系列基本生理和代謝途徑的研究，都闡明了生物體的代謝規律和控制其代謝的基本原理，

并且在控制微生物代謝的基礎上擴大利用微生物，發(fā)展酶學(xué)，推動(dòng)了生物化學(xué)的發(fā)展。從

20

世紀

30

年代起，人們利用微生物進(jìn)行乙醇、丙酮、丁醇、甘油、各種有機酸、氨基酸、

蛋白質(zhì)、油脂等的工業(yè)化生產(chǎn)。

1929

年，弗萊明發(fā)現青霉菌能抑制葡萄球菌的生長(cháng)，揭示了微生物間的拮抗關(guān)系，并

發(fā)現了青霉素。

1949

年，瓦克斯曼在他多年研究土壤微生物所積累資料的基礎上，發(fā)現了

鏈霉素。

此后陸續發(fā)現的新抗生素越來(lái)越多。

這些抗生素除醫用外，

也應用于防治動(dòng)植物的

病害和食品保藏。

1941

年，比德?tīng)柡退啬酚?/p>

X

射線(xiàn)和紫外線(xiàn)照射鏈孢霉，使其產(chǎn)生變異，獲得營(yíng)養缺

陷型。

他們對營(yíng)養缺陷型的研究不僅可以進(jìn)一步了解基因的作用和本質(zhì)，

而且為分子遺傳學(xué)

打下了基礎。

1944

年，埃弗里第一次證實(shí)了引起肺炎球菌形成莢膜遺傳性狀轉化的物質(zhì)是

脫氧核糖核酸

(DNA)

1953

年，沃森和克里克提出了

DNA

分子的雙螺旋結構模型和核酸半

保留復制學(xué)說(shuō)。

富蘭克爾

-

康拉特等通過(guò)煙草花葉病毒重組試驗，證明核糖核酸

(RNA)

是遺傳信息的載

體，為奠定分子生物學(xué)基礎起了重要作用。其后，又相繼發(fā)現轉運核糖核酸

(tRNA)

的作用機

制、

基因三聯(lián)密碼的論說(shuō)、

病毒的細微結構和感染增殖過(guò)程、

生物固氮機制等微生物學(xué)中的

重要理論，展示了微生物學(xué)廣闊的應用前景。

1957

年，科恩伯格等成功地進(jìn)行了

DNA

的體外組合和操縱。近年來(lái)，原核微生物基因

重組的研究不斷獲得進(jìn)展，

胰島素已用基因轉移的大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)，

干擾素也已開(kāi)始用細

菌生產(chǎn)。現代微生物學(xué)的研究將繼續向分子水平深入，向生產(chǎn)的深度和廣度發(fā)展。

在微生物學(xué)的發(fā)展過(guò)程中，

按照研究?jì)热莺湍康牡牟煌?/p>

相繼建立了許多分支學(xué)科：

研

究微生物基本性狀的有關(guān)基礎理論的有微生物形態(tài)學(xué)、

微生物分類(lèi)學(xué)、

微生物生理學(xué)、

微生

物遺傳學(xué)和微生物生態(tài)學(xué)；

研究微生物各個(gè)類(lèi)群的有細菌學(xué)、

真菌學(xué)、

藻類(lèi)學(xué)、

原生動(dòng)物學(xué)、

病毒學(xué)等；

研究在實(shí)踐中應用微生物的有醫學(xué)微生物學(xué)、

工業(yè)微生物學(xué)、

農業(yè)微生物學(xué)、

食

品微生物學(xué)、乳品微生物學(xué)、石油微生物學(xué)、土壤微生物學(xué)、水的微生物學(xué)飼料微生物學(xué)、

環(huán)境微生物學(xué)、免疫學(xué)等。

由于微生物學(xué)各分支學(xué)科的相互配合、

互相促進(jìn)，

以及與生物化學(xué)、

生物物理學(xué)、

分子

生物學(xué)等學(xué)科的相互滲透，使其在基礎理論研究和實(shí)際應用兩方面都有了迅速的發(fā)展

5.微生物有哪些危害

微生物給人們帶來(lái)益處，也造成危害。人們利用微生物釀酒，生產(chǎn)檸檬酸，制造抗菌素和酶制劑等。然而微生物也有有害的一面，人、動(dòng)物和植物的大部分疾病，以及工業(yè)、商業(yè)、外貿等部門(mén)的許多材料和制品的霉變、腐蝕、受損，都是微生物造成的。

這里，我們先來(lái)談?wù)勎⑸锏钠茐淖饔谩?/p>

在銀行，計算機電子回路的增強塑料表面繁殖了霉菌，會(huì )導致計算機發(fā)生故障，業(yè)務(wù)出現差錯。

不論哪里的銀行，盡管它建筑豪華、設施齊全，但由于每天有許多人進(jìn)出，室內的微生物污染都十分嚴重。如果對室內空氣中浮游的微生物進(jìn)行一次測量，就會(huì )發(fā)現微生物的數量會(huì )出乎意料的多。其中還能分離出致癌性菌株黃曲霉和變色曲霉。

引起室內空氣中微生物增加的原因很多，但值得注意的是進(jìn)出銀行的各個(gè)方面的人，他們將從毛發(fā)、衣著(zhù)、手、物品中散布出微生物來(lái)。同時(shí)，粘附在紙幣上的霉菌和細菌也會(huì )引起第二次污染。試驗已經(jīng)證明，在用纖維材料制作的紙張、地毯和木材上，有許多致病菌存在著(zhù)。

這種令人憂(yōu)慮的微生物污染狀況除了銀行之外，醫院、飯店、寫(xiě)字樓、百貨大樓、街道、新干線(xiàn)和地下鐵路的電車(chē)、公共汽車(chē)等的內部也存在著(zhù)嚴重的問(wèn)題。特別是在醫院中，每天病人云集，交叉感染時(shí)常發(fā)生。進(jìn)入醫院是為了治療疾病，但醫院又是可怕的微生物感染地，這對于一般人是想象不到的。