離子色譜法使用(離子色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)需要的注意事項(xiàng)有哪些)
1.離子色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)需要的注意事項(xiàng)有哪些
離子色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)
1. 試劑用水需要到達(dá) 18.2M，洗脫液必須經(jīng) 0.45um 或更小的濾膜抽濾（必 要時(shí)可用二層濾膜過濾）真空脫氣后才可使用。濾膜為一次性，每次使 用前需要先過濾高純水以清洗干凈。抑制器再生液可以不過濾脫氣。
2. 環(huán)境必須無腐蝕氣體，通風(fēng)良好。 樣品一定要去除固體微粒后才能進(jìn)樣。如樣品比較臟可以先用濾紙粗濾 后再過 0.45um 的濾膜過濾，一定要得到澄清液后才經(jīng)濾頭進(jìn)樣。對有顏 色的骯臟的樣品要用做前處理后才可進(jìn)樣。
3. 洗脫液試劑需要優(yōu)級純以上。 分析柱不可摔打碰撞。 分析柱上有箭頭表示洗脫液流進(jìn)和流出的方向，不可以接反。 安裝分析柱時(shí)，為避免氣泡產(chǎn)生請按下述順序安裝： 擰開分析柱進(jìn)口接 頭螺絲，裝好配制的洗脫液，排氣泡后啟動(dòng) IC 泵，待有溶液從管接頭流 出后，把分析柱進(jìn)口接頭螺絲擰緊，待有溶液從分析柱出口流出時(shí)，不 要急于擰上出口接頭螺絲，讓溶液沖洗分析柱 5 分鐘左右，然后再接上 分析柱出口接頭螺絲。
4. 必須在有保護(hù)柱的情況下做樣。 不要把樣品中的氣泡注射入分析柱。 10. 裝標(biāo)準(zhǔn)的容量瓶不可用酸泡。
5. 高壓 IC 泵不可空轉(zhuǎn)。
6. 每天關(guān)機(jī)前要用淋洗脫液沖洗分析柱 30 分鐘。
7. 電腦中的電源管理和屏幕保護(hù)要關(guān)閉。
2.請問離子色譜儀具體操作步驟有哪些
操作步驟 ：
1、打開鋼瓶氣源開關(guān)，分壓表調(diào)到0.2-0.3（建議不關(guān)閉鋼瓶氣源）；
2、調(diào)節(jié)減壓閥到3-6Psi左右；
3、依次打開SP泵、EG淋洗液自動(dòng)發(fā)生器、DC色譜單元、AS自動(dòng)進(jìn)樣器和VWD紫外檢測器的電源開關(guān)。
4、如儀器長時(shí)間不使用或更換淋洗液后，要先打開平衡泵頭上的PRIME閥排氣。
5、打開電腦，待右下角變色龍服務(wù)器圖標(biāo)變灰色后，雙擊桌面的變色龍，打開控制面板。
6、開泵，根據(jù)連接的柱子設(shè)定泵流速（氨基酸0.22；糖PA10 1；糖PA200 0.4；陰離子1或1.2；氫氧化鉀濃度30mM；陽離子CS18:0.25）；設(shè)定柱箱溫度（30度）；
電導(dǎo)檢測器：根據(jù)具體的試驗(yàn)條件，在控制面板DC頁面選定抑制器類型和電流；在CD頁面設(shè)定并開啟檢測器溫度。
電化學(xué)檢測器：在ED頁面打開池子電壓，選擇CVMODE為INTAMP并
選定波形（WAVEFORM）。
7、系統(tǒng)平衡
8、編輯運(yùn)行樣品表（SEQUENCE）
9、系統(tǒng)平衡好后，停止采集基線，啟動(dòng)樣品表（依次點(diǎn)擊BATCH、START），選擇要運(yùn)行的樣品表。
10、做完樣后雙擊打開第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，點(diǎn)擊QNT-EDITER，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
11、關(guān)機(jī)前的工作
陰離子：如果樣品很復(fù)雜，先用高濃度氫氧化鈉（50-60mM氫氧化鈉）清洗系統(tǒng)15-20分鐘，然后在調(diào)到30mM正常濃度清洗30分鐘；
陽離子：用正常淋洗液條件（5mM）沖洗系統(tǒng)20分鐘；
糖PA10：使用200mM氫氧化鈉沖洗系統(tǒng)15分鐘，然后再換成18mM清洗15-20分鐘；
氨基酸：最好在結(jié)束樣品后走一空白梯度或進(jìn)針?biāo)咭?5分鐘的梯度；
糖PA200：用100mM氫氧化鈉/50mM醋酸鈉走20分鐘 。
12、關(guān)機(jī)
陰陽離子：將抑制器電流關(guān)掉，然后將泵逐步降為0； 氨基酸、糖：將電化學(xué)檢測池電壓關(guān)掉，然后將泵逐步降為0。 接著，斷開AS、DC、EG、DP、VWD的連接。關(guān)閉各設(shè)備的電源。建議不要關(guān)掉氮?dú)狻?/p>
3.以離子交換色譜法為例,簡述濕法裝柱的操作過程和注意事項(xiàng)
1.樣品處理：對被分離樣品有時(shí)要經(jīng)過水解等化學(xué)處理，樣品溶液一般要兼顧到濃度與粘度兩方面。
+ B4 ^: J i3 _) \- T: R/ |" v2.離子交換柱的安裝：層析柱內(nèi)徑必須粗細(xì)均勻，柱管大小可據(jù)實(shí)際需要選擇。柱下端膠塞中插入一放液管，膠塞上蓋以園形尼龍綢或發(fā)泡塑料片以防止交換樹脂流出。
+ H/ ?0 X, d' E2 P8 h& S- U3.裝柱：⑴裝柱質(zhì)量是確保柱層析分離效果的技術(shù)關(guān)鍵之一，越是高技術(shù)層析（如使用毛細(xì)管層析柱的高級層析設(shè)備）裝柱的技術(shù)要求和難度越高，以至手工操作很難達(dá)到。⑵裝柱的質(zhì)量要求，無論是手工、機(jī)械、自動(dòng)化裝柱都是一樣的，要求裝入柱中的分離載體材料松緊適度，分布均勻，無氣泡、無斷層、無結(jié)節(jié)，能保持正常的溶脹形態(tài)和結(jié)構(gòu)；⑶裝入柱中樹脂的高度與直徑之比因分離對象和分離目的不同而相差很大，本教材推薦的肝素鈉洗脫柱裝柱高度是柱徑的4~6倍。
⑷操作次序，以手工裝入溶脹的D254樹脂（濕法裝柱）為例，其操作程序可概括為：①查連接（柱與塞之間、上下塞與進(jìn)出液管之間、梯度混合器與進(jìn)液管之間、出液管與收集器之間等等的連接是否正確、緊密），②試止漏（塞子、接頭、活塞開關(guān)處在長時(shí)間滿負(fù)荷下不泄漏），③加隔離緩沖墊（緊貼于柱子下端塞子的內(nèi)平面），④加少許平衡液于空柱內(nèi)，⑤趕氣泡（緩沖墊內(nèi)和出水管中的氣泡），⑥開通放水開關(guān)，⑦與放水量保持相當(dāng)?shù)牧魉?，向柱?nèi)勻速加完載體材料漿，⑧關(guān)閉放水開關(guān)，令樹脂自然下沉，⑨用洗滌液和清水洗滌樹脂，⑩最后用緩沖液過柱和平衡柱，使樹脂結(jié)構(gòu)平衡穩(wěn)定，⑾在樹脂表面蓋上一片尼龍或泡膜塑料，并與柱子內(nèi)壁保持嚴(yán)密接觸，以防加樣時(shí)樹脂泛起。 （ ？6 Y, g6 D5 S2 e- z% v b* m4.加樣：緩緩打開柱子下端的放液開關(guān)，使柱內(nèi)液面剛好降至樹脂面時(shí)便立即將樣品溶液小心地加到尼龍或泡膜塑料片上，待樣品液面剛好進(jìn)入樹脂層內(nèi)便立即加入少許平衡緩沖液，以清洗粘附在覆蓋層中的樣品，并隨之進(jìn)入樹脂層。
當(dāng)柱內(nèi)液位接近樹脂表面時(shí)便立即添加洗滌液進(jìn)行洗滌操作。$ o+ c9 M: n3 `% Q 5.洗滌：選用合適的洗滌液、恰當(dāng)?shù)目傆昧考跋礈炝魉?，小心洗滌柱?nèi)樹脂，以除去不被離交樹脂吸附的雜質(zhì)。
： K0 s* j/ p; W4 d） o7 W6 _ 6.洗脫：由洗脫曲線找出洗脫液的最佳濃度和適當(dāng)?shù)目偭俊⒉僮鲏杭傲魉龠M(jìn)行洗脫。 5 m- U F# X! m' M. O# g! |7.監(jiān)測：用敏感快速的方法（參見下文“測定”）監(jiān)測分離成分是否洗脫出來以及洗脫峰的軸向分布 9 v2 C$ h- _- \: S8.收集：一旦發(fā)現(xiàn)待分離成分洗脫出來便可進(jìn)行一步或分步收集，并可根據(jù)各成分洗脫峰的軸向分布和濃度監(jiān)測，決定產(chǎn)品收集濃度區(qū)段，棄去的洗脫液可循環(huán)用于相同成分的洗脫。
1 v7 I2 v8 H, m8 y3 ] M; J8 m9.沉淀/離心：用沉淀劑可將分離組分沉淀或離心下來脫水干燥，沉淀劑回收再用。 " a3 @7 z0 a' t10.脫水干燥：加入適當(dāng)脫水劑為如無水乙醇、丙酮或乙醚脫水后進(jìn)一步干燥。
5 _" H" J" X0 e% v" V 11.測定：對層析所得產(chǎn)品可稱重或測定活性計(jì)算其得量和收率。. ^7 ]4 x, e- `1 p# y- z. d7 g9 m5 ` 【注意事項(xiàng)】4 G; U! }* `$ X7 C" b: b0 f 1.應(yīng)根據(jù)被分離物質(zhì)的理化性質(zhì)、分子大小、分子形狀和分離的目的要求，選擇分離效果好、交換容量大而機(jī)械強(qiáng)度較高的分離載體材料。
市售的分離載體有明確的規(guī)格型號、理化性質(zhì)、功能作用、活化再生和保養(yǎng)存放等技術(shù)參數(shù)資料可供用戶選擇。 * K7 Q, U. T% x8 y5 R2.應(yīng)根據(jù)分離純化的對象、規(guī)模選擇層析柱的長短、粗細(xì)、柱高與內(nèi)徑之比，使達(dá)到最佳分離效果；此外，柱子材料的化學(xué)性質(zhì)要穩(wěn)定、透明，內(nèi)徑要均一、光滑，死腔要愈小愈好，要有利于緊固、連接、裝柱與維護(hù)。
4 E& F! k7 Q. W3 [& s/ k( ?- P3.柱子安放要垂直、穩(wěn)固，與之相連的各種線路、管道、設(shè)備、設(shè)施的布局和連接要緊奏，要方便操作、觀察與維護(hù)。4 F5 w( v8 w+ c4 C 4.要求裝入柱中的分離載體材料松緊適度，分布均勻，無氣泡、無斷層、無結(jié)節(jié)，能保持正常的溶脹形態(tài)和結(jié)構(gòu)。
5 F n1 O% }8 d z+ T0 L# t2 |3 C 5.保持柱內(nèi)樹脂層面平整、層序結(jié)構(gòu)始終如一是確保柱層析分離效果的又一技術(shù)關(guān)鍵。為此，從裝柱到洗脫結(jié)束的過程中，尤其是加樣、洗滌、洗脫過程中要始終保持柱內(nèi)液位不低于柱內(nèi)樹脂的頂部平面，尤其要始終保持柱內(nèi)樹脂的層序結(jié)構(gòu)始終如一，不被打亂，特別要防止更換濃度不同的洗滌洗脫液時(shí)發(fā)生“翻缸”而攪亂樹脂層結(jié)構(gòu)，“壓缸”而造成柱層斷裂和梗塞斷流。
7 z/ W" C+ E8 q: i& t g6.注意保持一定的操作壓，這對確保層析柱流速和分離效果十分重要。因?yàn)榱魉俨粌H與洗脫液加在柱上的壓力（因液面差造成）有關(guān)，也與裝柱材料的粒度、交聯(lián)度、機(jī)械強(qiáng)度有關(guān)。
應(yīng)針對具體情況建立一個(gè)操作壓、流速和分離效果的最佳平衡點(diǎn)。 ； N( j K7 n0 T" {9 [$ S6.顯著標(biāo)明各種洗滌、洗脫液的技術(shù)參數(shù)，嚴(yán)禁亂用和混用。
) M) k" o* {2 g( F 7.制作洗脫曲線，確定洗脫液收集方案，設(shè)置洗脫監(jiān)控點(diǎn)。2 N; I* F% \6 e9 I5 J% X1 V 8.注意剔除破損樹脂，及時(shí)補(bǔ)足流失、破損的循環(huán)樹脂量。
# S5 F F8 K3 V2 ]9 A1 E6 U+ o9.嚴(yán)格掌握新、舊樹脂的活化、再生條件，及時(shí)再生舊樹脂。
4.離子色譜常見問題有哪些
1、電導(dǎo)檢測器常見故障
電導(dǎo)檢測器常見故障是檢測池被污染。
故障原因：污染物主要來源于沒有經(jīng)過適當(dāng)前處理的樣品，如濃度過高、復(fù)雜的樣品基體等。
故障現(xiàn)象：基線噪聲變大，靈敏度降低。
2、分析泵常見故障
分析泵常見故障是泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡和漏液
故障現(xiàn)象：基線的噪聲加大，色譜峰形變差（出現(xiàn)亂峰）。
3、抑制器使用中的常見故障與排除
抑制器在離子色譜儀中具有舉足輕重的作用。抑制器工作性能的好壞對分析結(jié)果有很大的影響。抑制器最常見的故障是漏液，使峰面積減?。`敏度下降）和背景電導(dǎo)升高。
(1)峰面積減小
造成峰面積減小的主要原因有：微膜脫水、抑制器漏液、溶液流路不暢和微膜被玷污。抑制器長期不用，會(huì)發(fā)生微膜脫水現(xiàn)象，為激活抑制器，可用注射器向陰離子抑制器內(nèi)以淋洗液流路相反的方向注入少許0.2mol/L的硫酸溶液。同時(shí)向再生液進(jìn)口注入少許純凈水，并將抑制器放置半小時(shí)以上。抑制器內(nèi)玷污的金屬離子可以用草酸鈉清洗。
(2)背景電導(dǎo)值高
在化學(xué)抑制型電導(dǎo)檢測分析過程中，若背景電導(dǎo)高，說明抑制器部分存在一定的問題。大多數(shù)是操作不當(dāng)引起的。例如淋洗液或再生液流路堵塞，系統(tǒng)中無溶液流動(dòng)造成背景電導(dǎo)偏高或使用的電抑制器電流設(shè)置的太小等。膜被污染后交換容量下降亦會(huì)使背景電導(dǎo)升高。而失效的抑制器在使用時(shí)會(huì)出現(xiàn)背景電導(dǎo)持續(xù)升高的現(xiàn)象，此時(shí)應(yīng)更換一支新的抑制器。
(3)漏液
抑制器漏液的主要原因是抑制器內(nèi)的微膜沒有充分水化。
因此，長時(shí)間未使用的抑制器在使用前應(yīng)讓微膜水溶脹后再使用。另外要保證再生液出口順暢，因此反壓較大時(shí)也會(huì)造成抑制器漏液。另外抑制器保管不當(dāng)造成抑制器內(nèi)的微膜收縮、破裂也會(huì)發(fā)生漏液現(xiàn)象。
