核酸含量的測定方法各有何優(yōu)缺點(diǎn)(測定核酸含量的方法)
1.測定核酸含量的方法有哪些
核酸中的有機無(wú)機磷酸——→無(wú)機磷酸+鉬酸——→磷鉬酸+還原劑（抗壞血酸等）——→鉬蘭
鉬蘭的最大吸收波長(cháng)在660nm，在一定濃度范圍內，溶液的吸收值與無(wú)機磷的含量成正比。該法測得的是總磷量，需減去無(wú)機磷的含量才是核酸的含磷量。
（二）定糖法
核酸中的戊糖可在濃鹽酸或濃硫酸作用下脫水生成醛類(lèi)化合物，醛類(lèi)化合物可與某些成色劑縮合成有色化合物，可用比色法或分光光度法測定其溶液中的吸收值，在一定濃度范圍內，溶液的吸收值與核酸的含量成正比。
1、核糖的測定
生成的綠色化合物在λ=670nm處有最大的吸收值。
2、脫氧核糖的測定
DNA中的脫氧核糖可在濃硫酸作用下脫水生成ω-羥基-γ-酮戊酸，該化合物可與二苯胺生成蘭色化合物，在λ=595nm處有最大吸收值。
（三）紫外吸收法
根據核酸分子中的嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)在λ=260nm處有最大吸收值，可采用紫外分光光度法測定核酸的含量。
2.紫外可見(jiàn)分光光度計法測核酸含量有何優(yōu)缺點(diǎn)
方便，靈敏，除了知道含量，還知道組成成分。
從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長(cháng)λmax和最小吸收波長(cháng)λmin。物質(zhì)的吸收光譜具有與其結構相關(guān)的特征性。
可以通過(guò)特定波長(cháng)范圍內樣品的光譜與對照光譜或對照品光譜的比較，或通過(guò)確定最大吸收波長(cháng)，或通過(guò)測量?jì)蓚€(gè)特定波長(cháng)處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。
在最大吸收波長(cháng)處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數法求算出樣品溶液的濃度。
擴展資料：
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長(cháng)，以及相應的吸收系數是該物質(zhì)的物理常數。在一定條件下，物質(zhì)的吸收系數是恒定的，且與入射光的強度、吸收池厚度及樣品濃度無(wú)關(guān)。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數后，可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸光度。
即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測定，故又稱(chēng)之為比色分析。
參考資料來(lái)源：百度百科-紫外-可見(jiàn)分光光度法
3.核酸含量的測定方法及原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中堿基共軛結構在近紫外光波長(cháng)260nm處有最大吸收，吸收強度與核酸濃度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過(guò)測定樣品中的有機P量來(lái)進(jìn)行核酸定量。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。
核酸廣泛存在于所有動(dòng)植物細胞、微生物體內，生物體內的核酸常與蛋白質(zhì)結合形成核蛋白。不同的核酸，其化學(xué)組成、核苷酸排列順序等不同。
根據化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡(jiǎn)稱(chēng)RNA）和脫氧核糖核酸（簡(jiǎn)稱(chēng)DNA）。
4.核酸含量測定的方法和原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中堿基共軛結構在近紫外光波長(cháng)260nm處有最大吸收，吸收強度與核酸濃度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過(guò)測定樣品中的有機P量來(lái)進(jìn)行核酸定量。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。
核酸廣泛存在于所有動(dòng)植物細胞、微生物體內，生物體內的核酸常與蛋白質(zhì)結合形成核蛋白。不同的核酸，其化學(xué)組成、核苷酸排列順序等不同。
根據化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡(jiǎn)稱(chēng)RNA）和脫氧核糖核酸（簡(jiǎn)稱(chēng)DNA）。
5.用紫外分光光度法測定核酸的缺點(diǎn)有哪些
核酸、核苷酸及其衍生物的分子結構中的嘌呤、嘧啶堿基具有共軛雙健系統（-C=C一C=C 一），能夠強烈吸收250~280nm 波長(cháng)的紫外光.核酸（DNA,RNA）的最大紫外吸收值在260nm 處.遵照Lambert-Beer 定律，可以從紫外光吸收值的變化來(lái)測定核酸物質(zhì)的含量.
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶堿基互變異構的情況不同，紫外吸收光也隨之表現出明顯的差異，它們的摩爾消光系數也隨之不同.所以，在測定核酸物質(zhì)時(shí)均應在固定的pH溶液中進(jìn)行.
核酸的摩爾消光系數（或吸收系數），通常以ε（ρ）來(lái)表示，即每升含有一摩爾核酸磷的溶液在260nm 波長(cháng)處的消光值（即光密度，或稱(chēng)為光吸收）.核酸的摩爾消光系數不是一個(gè)常數，而是依賴(lài)于材料的前處理、溶液的pH 和離子強度發(fā)生變化.它們的經(jīng)典數值（pH = 7.0）如下：
DNA 的ε（ρ）= 6 000 8 000
RNA 的ε（ρ）= 7 000 10 000
小牛胸腺DNA 鈉鹽溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 6 600,DNA 的含磷量為9.2%，含1μg/mL DNA 鈉鹽的溶液光密度為0.020.RNA 溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 7 700~7 800,RNA 的含磷量為9.5%，含1μg /mL RNA 溶液的光密度為0.022~0.024.采用紫外分光光度法測定核酸含量時(shí)，通常規定：在260nm 波長(cháng)下，濃度為1μg/mL 的 DNA 溶液其光密度為0.020，而濃度為1μg/mL 的RNA 溶液其光密度為0.024.因此，測定未知濃度的DNA (RNA)溶液的光密度OD260nm，即可計算測出其中核酸的含量.該法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高，如核酸3μg/mL 的含量即可測出.對于含有微量蛋白質(zhì)和核苷酸等吸收紫外光物質(zhì)的核酸樣品，測定誤差較小，若樣品內混雜有大量的上述吸收紫外光物質(zhì)，測定誤差較大，應設法事先除去.
由于降解或水解作用，核酸的光密度可以增高約40%，這就是眾所周知的增色效應（hyperchromic effect）.在大分子的核酸中，氫鍵和π-鍵相互作用改變了堿基的共振行為.因此，核酸的光密度低于構成它的核苷酸的光密度，該現象稱(chēng)為減色效應（hypochromic effect）.
