小鼠眼部取血(小鼠眼球取血技巧是什么?)
1.小鼠眼球取血技巧是什么?
小鼠摘除眼球采血及分離血清
一.器材
離心管，彎頭鑷子，離心機，移液器
二.步驟
1. 摘除眼球采血
(1)左手拇、食指抓取小鼠雙耳及頸后皮膚，小指固定尾部；
(2)中指將小鼠左側前肢輕壓在胸骨心臟部位，無(wú)名指按在腹部，捻動(dòng)拇指，輕壓取血側眼部皮膚，使眼球充血突出；
(3)用彎頭鑷夾取眼球；
(4)根據需要捻動(dòng)拇指與食指的方向，使血液從眼眶內以不同速度垂直流入離心管；
(5)同時(shí)用左手中指輕按小鼠心臟部位，以加快心臟泵血速度；
(6)當血液流盡時(shí)，用脫臼法處死小鼠。
2. 分離血清
(1)將離心管中的血置37℃溫箱或水浴1小時(shí)，也可室溫2小時(shí)；
(2)再置4℃冰箱內3~4小時(shí)或過(guò)夜；
(3)待血液凝固血塊收縮后，4000rpm離心10分鐘；
(4)取上清于干凈的離心管中，保存于-20℃，或加入防腐劑（0.01%硫柳汞或0.02%疊氮鈉），置4℃冰箱中保存備用。
三.注意：
1. 采血前，可給小鼠喂點(diǎn)水；
2. 摘眼球采血取血量能達0.8~1.2ml，但老年和疾病小鼠血量會(huì )降低；
3. 采血場(chǎng)所有充足的光線(xiàn)；室溫夏季保持在25~28℃，冬季，15~20℃為宜；
4. 防止血液浸入眼部周?chē)l(fā)，否則會(huì )造成污染和溶血；
5. 按壓心臟時(shí)，用力一定要適度，若用力過(guò)度，一是會(huì )造成動(dòng)物采血中途死亡，使采血不完全，二是有可能引起溶血現象發(fā)生，影響實(shí)驗結果；
6. 采血用的器材和試管必須保持清潔干燥；
7. 采血時(shí)要防止小鼠掙扎，否則會(huì )損失比較多的血樣；
8. 血液凝固后不宜在4℃放置過(guò)久，否則會(huì )溶血。
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2.如何從大鼠眼眥中取血
1.大鼠麻醉問(wèn)題；
我們將一浸過(guò)乙醚的棉球放在一小盤(pán)里，然后放在大鼠附近，再找個(gè)能罩住老鼠和盤(pán)子的大燒杯樣的東西，留個(gè)口罩住老鼠。等他醉了就可實(shí)施手術(shù)了。要是中途有醒，直接握住大鼠，將其鼻子塞進(jìn)乙醚的瓶子里。觀(guān)察其麻醉狀態(tài)。不易過(guò)深，要不就死掉了。血都會(huì )變成黑色的，還粘稠。手段有些暴力，愛(ài)護動(dòng)物的筒子們不要責怪。
2.取血工具：
我們用的是化學(xué)上用來(lái)測熔點(diǎn)的毛細管，有一定硬度。用肝素鈉注射液潤洗過(guò)的，掰成幾段，太短了手抓著(zhù)不合適，太長(cháng)了容易凝血。
3.手術(shù)手法：
在大鼠一側的眼內側眼球和內測眼瞼與頭平面呈60度左右的夾角，溫柔的用力，就可見(jiàn)血源了。不要捅的太深，捅到骨頭上，也不會(huì )出血。太淺老鼠受罪也取不出血來(lái)。要注意剪斷老鼠的胡須，以防干擾或溶血。我都是兩側眼后輪流取的。
還有一個(gè)技術(shù)關(guān)鍵就是血流變慢的時(shí)候，要用握大鼠的食指和拇指向腦后靜脈方向用力按壓。或者一開(kāi)始的時(shí)候就要握緊。
剩下的就是收集血液，我們當時(shí)是兩個(gè)人幫忙完成的，一個(gè)人夠嗆。余下的都不是什么技術(shù)關(guān)鍵，不說(shuō)了。
3.小鼠眼球靜脈采血 這個(gè)實(shí)驗過(guò)程中,需要的實(shí)驗材料都有啥
這個(gè)實(shí)驗我做過(guò)。
所有的材料要先清洗并滅菌。
1.用鑷子直接將眼球摘除（這個(gè)是需要技巧的，有時(shí)候摘的不好，血會(huì )很少，最好先練習下）
2.摘除眼球后血就會(huì )直接流出來(lái)，這個(gè)時(shí)候用EP管，口挨著(zhù)眼睛那里就可以接了，當時(shí)我用的1.5ml的EP管就差不多夠用了。根據你小鼠的大小，可以提前先試一下大概能接多少。
3.接完后將EP管放在架子上放進(jìn)4度凝固一會(huì )兒就可以離心了
4.離心后用移液槍取上清測定。
PS：抓老鼠要注意哦，小心被抓傷、咬傷。
