prp實(shí)驗室提取(免疫球蛋白提取實(shí)驗注意事項及原因)

1.免疫球蛋白提取實(shí)驗注意事項及原因

IgG的分離與提純 （一）材料與試劑配制1.動(dòng)物血清2.硫酸銨飽和溶液 硫酸銨 800g~850g H2O 1 000ml 加熱至絕大部分溶質(zhì)溶解為止，趁熱過(guò)濾，置室溫過(guò)夜，然后以28%NH4OH調pH至7.0（不調pH值也可以）。

注：硫酸銨以質(zhì)量?jì)?yōu)者為佳，因次品中含有少量重金屬對蛋白質(zhì)巰基有影響。如次品必須除去重金屬，可在溶液中通入H2S，靜置過(guò)夜后濾過(guò)，加熱蒸發(fā)H2S即可。

3.0.01Mol/L pH7.4PB液 A液：0.10Mol/L NaH2PO4液 NaH2PO4?2H2O 15.60g 加H2O至 1 000.ml B液：0.10Mol/L Na2HPO4液 Na2HPO4?12H2O 35.80g 加H2O至 1 000ml 取A液19ml,B液81ml加水至1 000ml即可。4.1%BaCl2溶液5.納氏液 HgI 115.00g KI 80.00g 加H2O至 500.00ml 溶化后過(guò)濾，然后再加20%NaOH500.00ml，混合即可。

6.0.50 Mol/L的HCl液和0.50 Mol/L的NaOH液。7.洗脫液：0.03Mol/L的NaCl液。

8.透析袋（或玻璃紙）。（二）操作方法1.取20ml血清，加生理鹽水20ml，再逐滴加入（NH4）2SO4飽和溶液10ml，使成20%(NH4)2SO4溶液，邊加邊攪拌，充分混合后，靜置30min。

2.3 000r/min離心20min，棄去沉淀，以除去纖維蛋白。3.在上清液中再加（NH4）2SO4飽和溶液30ml，使成50%(NH4)2SO4溶液，充分混合，靜置30min。

4.3 000r/min離心20min，棄上清。5.于沉淀中加20ml生理鹽水，使之溶解，再加（NH4）2SO4飽和溶液10ml，使成33%(NH4)2SO4溶液，充分混合后，靜置30min。

6. 3 000r/min離心20min，棄上清，以除去白蛋白。重復步驟5,2~3次。

7. 用10ml生理鹽水溶解沉淀，裝入透析袋。8. 透析除鹽，在常水中透析過(guò)夜，再在生理鹽水中于4℃透析24h，中間換液數次。

以1%BaCl2檢查透析液中的SO42-或以納氏試劑檢查NH4+（取3~4ml透析液，加試劑1~2滴，出現磚紅色即認為有NH4+存在），直至無(wú) SO42-或NH4+出現為止。也可采用SephadexG25或電透析除鹽。

9. 離心去沉淀（去除雜蛋白），上清液即為粗提IgG （即γ球蛋白，如以36%的飽和硫酸銨沉淀血清的產(chǎn)物即為優(yōu)球蛋白，Euglobin，含γ球蛋白）。 10.過(guò)DEAE-纖維素層析柱。

（裝柱過(guò)程見(jiàn)層析技術(shù)）。以0.01Mol/L pH7.4PBS(0.03Mol/L NaCl)洗脫，收集洗脫液。

也可采用SephadexG150或G200柱。 11.蛋白質(zhì)及其定量鑒定（見(jiàn)本章第八節）。

12.IgG的純度鑒定 可采用下列方法之一鑒定。⑴ 區帶電泳：玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可。

加樣電泳后，只在γ—球蛋白的遷移部位出現一條帶。操作時(shí)，同時(shí)可用全血清樣品，不同濃度（NH4）2SO4鹽析樣品進(jìn)行電泳，以資比較。

⑵ 瓊脂雙相雙擴散鑒定：預先準備該IgG免疫異種動(dòng)物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗IgG血清進(jìn)行雙相雙擴散，如IgG提純的話(huà)，則在兩樣品孔之間出現一條沉淀線(xiàn)。

⑶ 免疫電泳鑒定：（操作見(jiàn)第三章免疫電泳部分）。孔內加待測樣品，電泳后，在槽內加抗IgG血清，瓊脂擴散24h，觀(guān)察結果。

如果提取的IgG純的話(huà)，則只出現一條弧形的沉淀線(xiàn)，且沉淀線(xiàn)位于γ—球蛋白區。此鑒定必須同時(shí)進(jìn)行全血清及抗血清抗體的免疫電泳，以資比較。

⑷ 圓盤(pán)電泳鑒定：用全血清樣品及提純樣品同時(shí)進(jìn)行圓盤(pán)電泳。全血清樣品在圓盤(pán)電泳上出現數十條區帶，而純化的IgG則只有一條區帶。

13.IgG的濃縮與保存 ⑴ IgG的濃縮：參看本章第九節。⑵ IgG的保存：一般濃縮至1%以上的濃度，再分裝成小瓶?jì)龈杀４妫蚣?.01%硫柳汞在普通冰箱或低溫冰箱保存，注意防止反復凍融。

（三）IgG的簡(jiǎn)易快速提取法 應用硫酸銨鹽析及DEAE-纖維素層析法提純化的IgG，不僅操作復雜、需時(shí)較長(cháng)，處理過(guò)程中樣品體積大大增加，而且透析時(shí)變性嚴重，容易引起抗體效價(jià)降低等。為了克服這一不足，特別是當大量提取IgG時(shí)，則往往采取下列的簡(jiǎn)易辦法。

1. DEAE-纖維素直接提取法 取樣品直接過(guò)DEAE-纖維素柱。下面介紹的是最為簡(jiǎn)單的燒杯法。

⑴ 以一定數量的DEAE52放入燒杯中，加入0.01Mol/L pH8.0PB緩沖液，靜置30min，去上清細粒，再重復一次。⑵用布氏漏斗（內放兩層濾紙）過(guò)濾。

⑶以5g濕重的DEAE-纖維素加1ml血清及3ml蒸餾水混合液的比例，加入各成分，充分攪拌。⑷于4℃中放置1h，中間攪拌數次。

⑸用布氏漏斗抽濾，再用0.01Mol/L pH8.0PB緩沖液沖洗纖維素，抽濾。濾液即為提取的IgG液。

2.DEAE-SephadexA-50為弱堿性陰離子交換劑，經(jīng)NaOH將Cl-型轉變?yōu)镺H-型后，可吸附酸性蛋白，血清中除γ-G屬中性蛋白外其余均屬酸性蛋白。當溶液的pH在6.5時(shí)，酸性蛋白均被DEAE-SephadexA-50吸附，只有γ-G留在溶液中。

因此利用這一原理可以提取γ-G。這種提取法流程大大縮短，純化前后樣品體積變化不大，而且所得γ-G無(wú)變性現象。

經(jīng)過(guò)四次處理，其純度也較好。缺點(diǎn)是收集量少，損耗大。

⑴ DEAE—SephadexA—50的處理。取DEAE-SephadexA-50若干克，懸浮于蒸餾水中，1h后傾去上層小顆粒，然后用0.50Mol/L NaOH處理1h，蒸餾水洗至中性，再用0.5 Mol/L HCl處理0.5h，水洗至中性，最后以0.01Mol/L pH6.5PB液平衡、抽干。

⑵ 取一定的血清量，加等量的0.01Mol/L pH6.5PB液，再加液體體積1/4的濾干的DEAE-SephadexA-50。

2.PrP自體血清怎么提取

PrP自體血清怎么提取。

是指利用自身的血液，提取出富含高濃度血小板和各種自身生長(cháng)因子的血漿。這些因子對促進(jìn)創(chuàng )傷的愈合和細胞的曾殖與分化及組織的形成有著(zhù)極其重要的作用。

那什么是自己血清美容，自體血清美容除皺的工作原理又是什么，自體血清的副作用，自體血清的注射的注意事項，看ACMETEA的規避風(fēng)險 什么是自體血清的美容自體血清的美容（Platelet Rich Plasma） 中文的意思是富含血小板、血漿或富含生長(cháng)因子的血液。 技術(shù)是指利用自身的血液，提取出富含高濃度血小板和各種自身生長(cháng)因子的血漿。

這些因子對促進(jìn)創(chuàng )傷的愈合和細胞的曾殖與分化及組織的形成有著(zhù)極其重要的作用。通過(guò)口服修復型膠原蛋白ACMETEA使血清因子提高皮膚內膠原蛋白和彈力纖維的含量。

ACMETEA修復因子啟動(dòng)比較低再生，引發(fā)肌體修復再生細胞，除皺效果更快速、持久。自體血清注射除皺的原理：注射血清除皺是通過(guò)采集靜脈血液，經(jīng)過(guò)離心濃縮血小板、白細胞等制作流程來(lái)制作成富高濃度生長(cháng)因子的自體血液，然后將其注入皮膚。

注射除皺是利用自身血液提煉出高濃度生長(cháng)因子；30分鐘內完成提煉過(guò)程；高濃度生長(cháng)因子富含大量白細胞，自體血清除皺術(shù)是運用自身血液制作的高濃度生長(cháng)因子血漿進(jìn)行治療，經(jīng)過(guò)離心濃縮血小板、白細胞等制作流程來(lái)制作成富高濃度生長(cháng)因子的自體血漿， 注射美容液通過(guò)真皮淺層注射方法注射到皮膚中，多種自體生長(cháng)因子可深入整個(gè)皮膚組織， 通過(guò)口服修復型膠原蛋白ACMETEA，達到調整皮膚全層結構，修復老化、受損的皮膚組織，從而達到改善皮膚質(zhì)地、收緊及提升面部皮膚、減輕皺紋凹陷性疤痕、恢復皮膚年輕狀態(tài)、延緩皮膚衰老的目的。自體血清注射副作用：注射主要是利用血液細胞進(jìn)行作用，這對于細胞分離技術(shù)及零菌環(huán)境的要求很高，注射后皮膚發(fā)紅，輕度疼痛，有紅色小凸起，嚴重者會(huì )出現細菌感染。

1. 感染：注射也屬侵入性操作，有發(fā)生感染的可能。一旦發(fā)生感染，要及時(shí)到醫院處理。

2. 瘀青：一般7-10天會(huì )自行消失。3. 發(fā)紅：一般維持1-2小時(shí)后，可自行消失。

4. 局部腫脹、瘀斑。如果自身嚴重缺乏營(yíng)養，會(huì )出現術(shù)后皮膚細胞再生失敗，發(fā)生持久性損傷，這是做微整形常見(jiàn)的風(fēng)險。

也是整形醫生更大的擔憂(yōu)。自體血清的美容前后必須口服大量修復型膠原蛋白ACMETEA，正確采用美容內外結合的技術(shù)，才可以安荃、可靠、作用持久。

自體血清注射美容注意事項：1、自體血清注射除皺要想達到皮膚再生的效果，注射前，可配合一些激光治療；而 注射后，想要進(jìn)行皮膚激光治療則需1個(gè)月以后再做。2、根據個(gè)人的體質(zhì)不同， 注射手術(shù)治療當天的腫脹程度會(huì )有所差異，但不必擔心，這是正常的現象。

通常情況，注射當天可以消腫，所以對日常生活沒(méi)有影響。眼底等比較敏感的部位當天可能會(huì )留針眼或者有發(fā)青的現象。

3、注射治療皮膚問(wèn)題時(shí)，不是所有的人都能進(jìn)行的。 注射也有不適宜人群，如孕婦，兒童，貧血者，發(fā)熱者，肝功能異常者，凝血功能異常者，肺血癥，敗血癥患者等。

這幾類(lèi)人群不要做注射，以免造成不良后果，甚至危及生命。ACMETEA如何預防 注射風(fēng)險？規避風(fēng)險一：紅腫、起泡。

解決方式：服用修復型膠原蛋白的細胞修復型膠原蛋白，修復受損細胞，抑制曾生。規避風(fēng)險二：干澀、暗淡、生斑等。

通過(guò)使用ACMETEA膠原蛋白中的雙倍雙項保濕因子修復，一方面可以快速生成保溫層，鎖住皮膚水份；另一方面可以有效穩定再生的膠原蛋白纖維細胞，鞏固皮層彈性構架。規避風(fēng)險三：塌陷、凹凸不平、皮層壞死。

美容要求很高，一是儀器和技術(shù)問(wèn)題，二是因為受術(shù)者自身體內細胞再生的營(yíng)養不足和膠原再生的營(yíng)養含量不足，術(shù)前術(shù)后沒(méi)有及時(shí)補充修復型膠原蛋白營(yíng)養源，以致術(shù)后修復失控，而塌陷、凹凸不平，嚴重的導致皮層壞死。所以不可本末倒置，重視內服才有的結果。

解決方式：注重術(shù)前20天，術(shù)后3個(gè)月早晚個(gè)一次ACMETEA修復型膠原蛋白，每次12克。規避風(fēng)險四：沒(méi)有效果。

這種情況是常見(jiàn)的，在此首先聲明不是 美容儀器引起的，主要原因是受術(shù)者體內膠原營(yíng)養不足，新生細胞營(yíng)養再生率不高而不能體現效果。解決方式：嚴格遵照醫囑根據自身情況合理完善修復營(yíng)養。

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