病毒核酸提取(病毒核酸的提取需要注意哪些?)
1.病毒核酸的提取需要注意哪些?
.一定要注意冰上操作，低溫離心。
2.戴口罩和勤換手套，去任何東西都要帶著(zhù)手套去取。
3.每次去器材的時(shí)候都要用鑷子去夾，鑷子要在酒精燈上燒一下。
4.所有的器材都要經(jīng)過(guò)DEPC浸泡后高壓后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，異丙醇等都保證沒(méi)有被RNA酶污染，不能用沒(méi)有泡過(guò)DEPC的槍頭去提取液體，一定要用DEPC浸泡過(guò)的槍頭去吸，如果發(fā)現試劑有可能被污染了，要立即更換。
5.吸取上清一定不要吸到中間層的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因為，吸到的蛋白很可能會(huì )對RNA產(chǎn)生降解作用。一定要少吸，不要貪多，RNA提取不要求量，更多的要求質(zhì)。
6.最后用75%的酒精洗一次就可以，盡量減少RNA提取時(shí)間。
7.最后一步，用DEPC水溶解RNA，不要用太多的體積，以保證RNA的濃度。
提取完后，電泳觀(guān)察結果，如果上面的兩條帶都比較清楚的話(huà)，說(shuō)明RNA提取的不錯，可以一次多逆轉錄幾管，不要把RNA凍存，以后在逆轉錄的效果不好。
1. SARS病毒樣品是具有高度傳染性的樣品，樣品的采集、保存、運輸、處理、實(shí)驗應遵循國家相應的管理規范和生物安全條例，進(jìn)行樣品處理時(shí)必須做好相關(guān)的保護措施，并在P3實(shí)驗室條件下小心操作，防止樣品飛濺，以確保實(shí)驗人員安全。
2. 本試劑盒只適用于體外檢測。
3. 實(shí)驗請分區操作：第一區為配液區：用來(lái)準備擴增所需試劑；第二區為樣品提取區：準備樣品和對照品處理；第三區為擴增區：PCR擴增檢測。各區物品均為專(zhuān)用，不得交叉使用，避免污染，實(shí)驗后立即清潔工作臺。
4. 本試劑盒中，樣品提取液可室溫避光保存，由于提取液低溫易結晶，為方便使用可先將提取液稍微加熱促溶，待結晶溶解后，再置于室溫避光處儲存。
5. 試劑盒各樣品管使用前，充分融化后混勻，并稍微離心。反應液分裝時(shí)和加模板時(shí)都應盡量避免產(chǎn)生氣泡，上機前各反應管注意蓋緊，以免熒光物質(zhì)污染儀器。
6. 擴增后，應避免打開(kāi)PCR反應管，以免造成污染，廢棄物品務(wù)請滅菌消毒后丟棄。工作臺及各物品定期用10%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈處理。
7. 由于SARS為RNA病毒，提取過(guò)程中應特別注意防止RNA酶對其的降解作用，所用加樣器、離心管、槍尖等均為專(zhuān)用，操作人員需穿潔凈實(shí)驗服，戴一次性手套和口罩，并且要勤換手套，減少RNA酶污染及交叉污染風(fēng)險。
8. 本試劑所用的控制品為人工合成蛋白外殼包裹的假病毒，無(wú)感染性。
2.從血液標本中提取病毒核酸有什么需要注意
從血液標本中提取病毒核酸有什么需要注意
標本的采集非常重要。 細菌感染通常是通過(guò)培養的方法檢測的，而病毒通常是通過(guò)抗原或者核酸來(lái)檢測的。 細菌培養和鑒定，以及藥敏試驗，是合理使用抗菌藥物的前提，好的標本決定一切，這是檢驗領(lǐng)域的一句俗話(huà)。不恰當的標本、不恰當的采集時(shí)間、不規范的采集方法，很可能造成假陰性，假陽(yáng)性，雜菌污染等，延誤診斷，危及生命。 對于嚴重感染，我們是需要確定病原菌的，標本應該選擇細菌可能定植的部位，如深部痰液，胸水，血液等，標本提取的時(shí)間應該在抗菌藥物使用前，最好在發(fā)生寒戰的時(shí)候。標本的采集一定要規范，避免把護士或醫生手上，導管，或者采集器本身的雜菌帶入標本。 病毒感染較少檢測，除了一些特殊的，如肝炎病毒，巨細胞病毒，以及其他一些傳染病病毒等。病毒要達到一定拷貝量，才能用核酸定量的方法檢測出來(lái)。而抗原抗體檢測，相對來(lái)水受到標本影響較小。
3.病毒DNA提取技巧?
以下是從動(dòng)物病毒中快速提取DNA的方法，請參考該方案采用離心操作，適合于從動(dòng)物組織樣品中快速提取病毒基因組DNA。
以下步驟都在室溫下進(jìn)行。 1. 取50-100mg的動(dòng)物組織加入約3倍體積的生理鹽水進(jìn)行勻漿，充分勻漿后10,000rpm離心2min去除殘余組織。
2. 取150 μl上清液至新的潔凈離心管中。 3. 加入500 μl DNA提取液至上清液中，顛倒混勻，室溫靜置5-10min裂解病毒。
4. 把DNA吸附柱裝在2ml收集管中，把裂解后的液體全部轉移至DNA吸附柱中，10,000 rpm離心1 min。 5. 倒棄濾液，把DNA吸附柱裝回收集管中，加入400 μl洗滌液至DNA吸附柱中，10,000 rpm離心1 min。
注：洗滌液初次使用前請先加入48 ml無(wú)水乙醇。使用完立即蓋上蓋，以防乙醇揮發(fā)。
6. 重復步驟5。 7. 倒棄收集管中的濾液，把DNA吸附柱裝回收集管中，10,000 rpm離心3 min。
8. 把DNA吸附柱裝在新的潔凈離心管中，加入30-50 μl洗脫液至吸附柱中央，靜置1-2min,10,000 rpm離心1min，所得即為DNA溶液，可用于后續實(shí)驗，若暫時(shí)不用，應于-20 ℃可儲存。
4.生化實(shí)驗——動(dòng)物組織中核酸的提取與鑒定,在提取核酸過(guò)程中,要注
這要看你要提的核酸式DNA還是RNA.首先說(shuō)一下DNA吧，一，首先要用10%的SDS處理勻漿器，這樣可以除去勻漿器中的污染。
二，最好在冰上進(jìn)行，防止降解
三，要加足夠的RNA酶及蛋白酶K使RNA及蛋白質(zhì)進(jìn)行充分的降解，而利于后面的抽提
四，抽提時(shí)要注意吸取上抄層，但不要弄破中間白色的蛋白層
五，用75%乙醇洗后，帶乙醇揮發(fā)后再用無(wú)菌水溶解
對于RNA 的提取最主要的就是要防止RNA酶對RNA的降解。首先就是要對所用試劑用DEPC處理。
第二，對于動(dòng)物組zd織塊，從負70拿出后，立即用勻漿器搗碎，以后各步驟要在冰上進(jìn)行。
5.核酸檢測應該注意事項
一、核酸檢測流程：
(1)發(fā)熱門(mén)診患者：可在發(fā)熱門(mén)診進(jìn)行核酸采集，檢測結果一般在發(fā)熱門(mén)診領(lǐng)取。
(2)入院患者或自愿接受核酸檢測人員：掛號后在各專(zhuān)科門(mén)診開(kāi)具相關(guān)檢測單，繳費后按照指示牌到“核酸采集門(mén)診”進(jìn)行采樣，檢測結果可到門(mén)診自助機打印領(lǐng)取。
(3)急診需要住院的患者：急診就診的危急重癥在急診科進(jìn)行核酸采集，采集后到相應科室住院，檢測結果在門(mén)診自助機打印領(lǐng)取。
二、核酸檢測怎么做？
新型冠狀病毒的核酸檢測取樣方法很簡(jiǎn)單，只要“輕輕一抹”。到了發(fā)熱門(mén)診或者是相應的檢查室，工作人員會(huì )讓患者張開(kāi)嘴，用一個(gè)像棉簽一樣的拭子去擦拭扁桃體和咽隱窩附近的分泌物，也可以通過(guò)鼻腔取鼻咽后部的分泌物，然后放到試管里面，再交給檢驗科去做相應的病毒核酸的檢查。
三、核酸檢測的注意事項
(1)采樣前請清水漱口，2小時(shí)內避免進(jìn)食。
(2)采樣前30分鐘請勿吸煙、勿喝酒、勿嚼口香糖等。
(3)來(lái)醫院體檢時(shí)，請盡量選擇非公共交通工具。
(4)進(jìn)入采樣場(chǎng)地前，請配合工作人員進(jìn)行體溫檢測及流行病學(xué)調查。
(5)被檢測者必須佩戴口罩，同時(shí)準備一個(gè)備用口罩。
(6)所有等候檢測人員一定要保持1米以上距離，避免交談。
(7)采集完畢后立即洗手或使用速干手消毒劑擦拭雙手，戴上備用口罩。
6.核酸分離提取的原則是什么
核酸分離提取的原則
核酸包括DNA、RNA兩種分子，在細胞中都是以與蛋白質(zhì)結合的狀態(tài)存在。真核生物的染色體DNA為雙鏈線(xiàn)性分子，原核生物的“染色體”、質(zhì)粒及真核細胞器DNA為雙鏈環(huán)狀分子；有些嗜菌體DNA有時(shí)為單鏈環(huán)狀分子，RNA分子在大多數生物體內均是單鏈線(xiàn)性分子，不同類(lèi)型的RNA分子可以具有不同的結構特點(diǎn)，如真核mRNA分子多數在3'端帶有poly(A)結構，至于病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多種多樣，有雙鏈環(huán)狀、單鏈環(huán)狀、雙鏈線(xiàn)狀及單鏈線(xiàn)狀等。
95%的真核生物DNA主要存在于細胞核內，其它5%為細胞器DNA，如線(xiàn)粒體、葉綠體等。RNA分子則主要存在于細胞質(zhì)中，約占75%，另有10%在細胞核內，15%在細胞器中，RNA以rRNA的數量最多（80%-85%）,tRNA及核內小分子RNA占10%-15%，而mRNA分子大小不一，序列各異。總的來(lái)說(shuō)，DNA分子的總長(cháng)度一般隨著(zhù)生物的進(jìn)化程度而增大，而RNA的分子量與生物進(jìn)化無(wú)明顯關(guān)系。
分離純化核酸總的原則：
1.應保證核酸一級結構的完整性；2.排除其它分子的污染。
為了保證核酸結構與功能的研究，完整的一級結構是最基本的要求，因為遺傳信息全部貯存在一級結構之中，核酸的一級結構還決定其高級結構的形式以及和其它生物大分子結合的方式。對于核酸的純化應達到以下三點(diǎn)要求：
1.核酸樣品中不存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子；
2. 其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類(lèi)分子的污染應降到最低程度；
3. 排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子時(shí)應去除RNA，反之亦然.
為了保證分離核酸的完整性和純度，在實(shí)驗過(guò)程中，應注意以下事項：
1. 盡量簡(jiǎn)化操作步驟，縮短提取過(guò)程，以減少各種有害因素對核酸的破壞；
2.減少化學(xué)因素對核酸的降解，為避免過(guò)酸、過(guò)堿對核酸鏈中磷酸二酯鍵的破壞，操作多在pH4-10的條件下進(jìn)行；
3.減少物理因素對核酸的降解，物理降解因素主要是機械剪切力，其次是高溫。機械剪切力包括強力高速的溶液振蕩、攪拌，使溶液快速地通過(guò)狹長(cháng)的孔道，細胞突然置于低滲液中，細胞爆炸式破裂以及DNA樣本的反復凍貯。這些操作細節在實(shí)驗操作中應倍加注意。機械剪切作用的主要危害對象是大分子量的線(xiàn)性DNA分子，如真核細胞的染色體DNA。對分子量小的環(huán)狀DNA分子，如質(zhì)粒DNA及RNA分子，威脅相對小些。高溫如長(cháng)時(shí)間煮沸，除水沸騰帶來(lái)的剪切力外，高溫本身對核酸分子中的有些化學(xué)鍵也有破壞作用。核酸提取過(guò)程中，一般在低溫操作，但現在發(fā)現在室溫快速提取與低溫提取，獲得核酸的質(zhì)量沒(méi)有太大差異.
4.防止核酸的生物降解，細胞內或外來(lái)的各種核酸酶消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵，直接破壞核酸的一級結構，其中DNA酶，需要金屬二價(jià)離子Mg2 、Ca2 的激活，使用EDTA、檸檬酸鹽螯合金屬二價(jià)離子，基本可以抑制DNA酶活性。而RNA酶不但分布廣泛，極易污染樣品，而且耐高溫、耐酸、耐堿、不易失活，所以是生物降解RNA提取過(guò)程的主要危害因素.
核酸提取的主要步驟，無(wú)外乎破碎細胞，去除與核酸結合的蛋白質(zhì)以及多糖、脂類(lèi)等生物大分子，去除其它不需要的核酸分子，沉淀核酸，去除鹽類(lèi)，有機溶劑等雜質(zhì)，純化核酸等。核酸提取的方案，應根據具體生物材料和待提取的核酸分子的特點(diǎn)而定，對于某特定細胞器中富集的核酸分子，事先提取該細胞器，然后提取目的核酸分子的方案，可獲得完整性和純度兩方面質(zhì)量均高的核酸分子。
7.做核酸檢測有什么注意事項
1、為避免出現嘔吐情況采樣前2小時(shí)請勿進(jìn)食； 2、釆樣前30分鐘請勿吸煙、喝酒、嚼口香糖等； 3、盡量在單獨密閉空間采樣，采樣后開(kāi)窗通風(fēng)，任何時(shí)候都不要用手或其他物品觸及拭子采樣冠（棉簽前端）； 4、在采集口咽拭子時(shí)檢測者頭后仰，張口發(fā)出"啊"音，有助于暴露咽喉，采樣過(guò)程無(wú)特殊不適，但部分敏感人員可能出現刺激性干咳、惡心、嘔吐等癥狀，休息后即可緩解，受檢者可配合采集人員盡量放松、保持深呼吸，大部分人員可避免不適； 5、檢測者要戴口罩，同時(shí)準備一個(gè)備用口罩，要保持人際1米以上距離，勿擁擠； 6、接受咽拭子采樣時(shí)，將口罩取下折疊封裝在塑料袋里放入口袋中，釆集完樣品后立即洗手或用免洗酒精擦拭雙手，戴上備用口罩，將廢棄口罩投入指定醫用垃圾桶； 7、在采集鼻咽拭子前檢測者應告知采集人員是否鼻中隔彎曲及鼻腔手術(shù)史，過(guò)程中可能出現鼻部酸癢感，刺激打噴嚏，可立即用紙巾或手肘遮擋； 8、鼻咽拭子采集后可能出現少量鼻腔出血，一般不需要特殊處理，如出血量較多請及時(shí)到醫院進(jìn)行處理。
另外，血清抗體檢測不受飲食影響，無(wú)需空腹。擴展資料： 核酸檢測的四類(lèi)重點(diǎn)人群： 1、有相關(guān)癥狀者 出現咳嗽、發(fā)熱等相關(guān)癥狀，尤其是近期有可能接觸過(guò)確診病例的人。
2、重點(diǎn)崗位工作者 醫務(wù)人員，餐廳服務(wù)員，警察，外賣(mài)，配送員。 3、高風(fēng)險區域人員 確診病例曾經(jīng)到過(guò)的地區的人，及其密切接觸者也應該重視。
4、近期入境人群及密切接觸者核酸檢測法 - 搜狗百科核酸檢測法（英文名：Nucleic acid detection method）是通過(guò)查找患者的呼吸道標本、血液或糞便中是否存在外來(lái)入侵的病毒的DNA和RNA，來(lái)判斷是否被病毒感染的方法，是新型冠狀病毒感染確診的金標準。新冠病毒感染人體之后，首先會(huì )在呼吸道系統中進(jìn)行繁殖，因此可以通過(guò)檢測痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判斷人體是否感染病毒。
/v66902107.htm?fromTitle=%E6%A0%B8%E9%85%B8%E6%A3%80%E6%B5%8B。
8.分離純化核酸有哪些注意事項
使用方法因廠(chǎng)家不同而不同，下面是一氪生物技術(shù)的核酸純化試劑使用方法及注意事項，供參考： 步驟一：使用無(wú)水乙醇與純化水配制70%乙醇備用。
步驟二：從2-8℃冰箱中取出磁珠懸浮液，在室溫條件下震蕩混勻，平衡30min。 步驟三：將充分震蕩混勻平衡后的磁珠加入待純化酶反應或PCR反應產(chǎn)物溶液中。
磁珠加入體積分別參考圖1和圖2，若待純化產(chǎn)物體積不足，可用純化水或10mM Tris-HCl(pH8.0)補充至相應體積。 步驟四：用移液器反復吹打10次，將磁珠懸浮液和PCR產(chǎn)物或者酶反應物充分混勻，室溫條件下靜置5min。
步驟五：將反應板放置在磁力架上，靜置2min，待溶液澄清后將上清吸走，轉入廢液桶內。 步驟六：向反應板中加入200μL新鮮配置的70%的乙醇，室溫靜置30s。
靜置結束后將乙醇吸走，轉入廢液桶內。操作環(huán)節不可將反應板從磁力分離架上拿下或將磁珠吹散。
步驟七：重復步驟六。 步驟八：保持反應板置于磁力架上狀態(tài)，室溫開(kāi)蓋晾干2min以去除殘存的乙醇。
步驟九：將反應板從磁力架上取下來(lái)，加入50μL洗脫液，移液器反復吹打10次混勻，室溫靜置3min。洗脫液加入量根據實(shí)際需要而定，但應不少于5μL。
步驟十：將反應板重新放置在磁力架上，室溫靜置1min，上清液即純化后的DNA產(chǎn)物。 步驟十一：將上清液轉入新的反應管或者反應板中，供下一步反應或檢測使用。
