病毒分離與鑒定方法(病毒鑒定常用方法)
1.病毒鑒定常用方法有哪些
寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學(xué)交叉反應，目前主要采用病毒核酸檢測。
開(kāi)展蚊媒寨卡病毒檢測時(shí)，對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲(chóng)進(jìn)行病毒核酸檢測。
開(kāi)展寨卡病毒實(shí)驗室檢測時(shí)，應同時(shí)考慮登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒實(shí)驗室檢測應按照相應的技術(shù)指南開(kāi)展。
（一）臨床標本檢測。
1.病原學(xué)檢測
病原學(xué)檢測主要適用于急性期血液標本，一般認為發(fā)病7天內檢測陽(yáng)性率高。
(1)核酸檢測：采用熒光定量RT-PCR方法，是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。
(2)病毒分離：將標本接種于蚊源細胞（C6/36）或哺乳動(dòng)物細胞（BHK21、Vero）進(jìn)行分離培養，出現病變以后，用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進(jìn)行病毒分離。
2.血清學(xué)檢測
(1)血清特異性IgM抗體：發(fā)病3天后可檢出病毒特異性IgM抗體，但發(fā)病7天后檢出率高。可采用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽(yáng)性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應，易于產(chǎn)生假陽(yáng)性。
(2)中和抗體：采用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽(yáng)轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙腦等其他常見(jiàn)黃病毒感染，可以確診。
（二）媒介標本檢測。
1.標本處理
將分類(lèi)后的伊蚊成蚊或幼蟲(chóng)，按照采集地點(diǎn)，每10~20只為一份進(jìn)行研磨處理。
2.病毒核酸檢測
用RT-PCR的方法進(jìn)行寨卡病毒核酸檢測
3.病毒分離
病毒核酸陽(yáng)性的標本進(jìn)行病毒分離。
2.病毒鑒定常用方法有哪些
寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。
寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學(xué)交叉反應，目前主要采用病毒核酸檢測。開(kāi)展蚊媒寨卡病毒檢測時(shí)，對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲(chóng)進(jìn)行病毒核酸檢測。
開(kāi)展寨卡病毒實(shí)驗室檢測時(shí)，應同時(shí)考慮登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒實(shí)驗室檢測應按照相應的技術(shù)指南開(kāi)展。
（一）臨床標本檢測。1.病原學(xué)檢測病原學(xué)檢測主要適用于急性期血液標本，一般認為發(fā)病7天內檢測陽(yáng)性率高。
（1）核酸檢測：采用熒光定量RT-PCR方法，是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。（2）病毒分離：將標本接種于蚊源細胞（C6/36）或哺乳動(dòng)物細胞（BHK21、Vero）進(jìn)行分離培養，出現病變以后，用檢測核酸的方法鑒定病毒。
也可使用乳鼠腦內接種進(jìn)行病毒分離。2.血清學(xué)檢測（1）血清特異性IgM抗體：發(fā)病3天后可檢出病毒特異性IgM抗體，但發(fā)病7天后檢出率高。
可采用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽(yáng)性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應，易于產(chǎn)生假陽(yáng)性。
（2）中和抗體：采用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽(yáng)轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙腦等其他常見(jiàn)黃病毒感染，可以確診。
（二）媒介標本檢測。1.標本處理將分類(lèi)后的伊蚊成蚊或幼蟲(chóng)，按照采集地點(diǎn)，每10~20只為一份進(jìn)行研磨處理。
2.病毒核酸檢測用RT-PCR的方法進(jìn)行寨卡病毒核酸檢測3.病毒分離病毒核酸陽(yáng)性的標本進(jìn)行病毒分離。
3.和病毒常用的分離培養方法有哪些區別
病毒的培養方法有動(dòng)物接種、雞胚培養、組織培養、細胞培養。
1、動(dòng)物接種：病毒經(jīng)注射、口服等途徑進(jìn)入易感動(dòng)物的體內后可大量增殖，并使動(dòng)物產(chǎn)生特定的反應。優(yōu)點(diǎn)：操作方面易行。缺點(diǎn)：受機體免疫力的影響，常需要用無(wú)菌動(dòng)物。疫苗和抗血清的生產(chǎn)。
2、雞胚培養：一般用9-12日齡的雞胚，分別接種于卵黃囊內，羊膜腔，尿囊腔等部位。用于病毒分離與疫苗生產(chǎn)。
3、組織培養：在離體活細胞上培養病毒的方法，組織塊培養：取組織片進(jìn)行培養。細胞培養：病毒感染細胞后，大多數引起細胞病變，稱(chēng)為病毒的致細胞病變作用。表現為細胞變形，胞漿內出現顆粒化，核濃縮、核裂解等。
4、采用該病毒所寄生的細胞的全素培養基來(lái)培養該細胞，培養一段時(shí)間后放進(jìn)特定的病毒就可以培養了，注意，若細胞是動(dòng)物細胞時(shí)培養基要加入血清。
4.分離病毒的鑒定是怎樣的
1.病毒在細胞內增殖的指征 （1）細胞致病作用（Cytopathogeniceffect,CPE）病毒在細胞內增殖引起細胞退形性變，表現為細胞皺縮、變圓、出現空泡、死亡和脫落。
某些病毒產(chǎn)生特征性CPE，普通光學(xué)倒置顯微鏡下可觀(guān)察上述細胞病變，結合臨床表現可做出預測性診斷（表23-4）。 免疫熒光（IF）法用于鑒定病毒具有快速、特異的優(yōu)點(diǎn)，細胞內的病毒或抗原可被熒光素標記的特異性抗體著(zhù)色，在熒光顯微鏡下可見(jiàn)斑點(diǎn)狀黃綠色熒光，根據所用抗體的特異性判斷為何種病毒感染。
表23-4 病毒在細胞內增殖的指征病毒增殖指征CPE病毒小RNA病毒單純皰疹病毒腺病毒副粘病毒HIV非CPE病毒正粘病毒副粘病毒風(fēng)疹病毒鼻病毒細胞園縮、單層破壞細胞腫大變園細胞變園堆積成葡萄狀多核巨細胞（合胞體）紅細胞吸附現象干擾并阻止其他病毒（如ECHO病毒）的細胞致病作用 （2）紅細胞吸附現象（） 流感病毒和某些副粘病毒感染細胞后24-48小時(shí)，以細胞膜上出現病毒的血凝素，能吸附豚鼠、雞等動(dòng)物及人的紅細胞，發(fā)生紅細胞吸附現象。 若加入相應的抗血清，可中和病毒血凝素、抑制紅細胞吸附現象的發(fā)生，稱(chēng)為紅細胞吸附抑制試驗。
這一現象不僅可作為這類(lèi)病毒增殖的指征，還可作為初步鑒定。 （3）干擾現象（Interference phenomenon）一種病毒感染細胞后可以干擾另一種病毒在該細胞中的增殖，這種現象叫干擾現象。
前者為不產(chǎn)生CPE的病毒（如風(fēng)疹病毒）但能干擾以后進(jìn)入的病毒（如ECHO病毒）增殖，使后者進(jìn)入宿主細胞不再生產(chǎn)CPE。 2.病毒感染性的定量測定 空斑形成單位 （Plaque-forming unit ,PFU）測定這是一種測定病毒感染性比較準確的方法。
將適當濃度的病毒懸液接種到生長(cháng)單層細胞的玻璃平皿或扁瓶中，當病毒吸附于細胞上后，再在其上復蓋一層溶化的半固體營(yíng)養瓊脂層，待凝固后，孵育培養。當病毒在細胞內復制增殖后，每一個(gè)感染性病毒顆粒在單層細胞中產(chǎn)生一個(gè)局限性的感染細胞病灶，病灶逐漸擴大，若用中性紅等活性染料著(zhù)色，在紅色的的背景中顯出沒(méi)有著(zhù)色的“空斑”，清楚可見(jiàn)。
由于每個(gè)空斑由單個(gè)病毒顆粒復制形成，所以病毒懸液的滴度可以用每毫升空斑形成單位（PFU）來(lái)表示。 （2）50%致死量（LD50）或50%組織細胞感染量（TCID50）的測定本法可估計所含病毒的感染量。
方法是測定病毒感染雞胚，易感動(dòng)物或組織培養后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小病毒量，即將病毒懸液作10倍連續稀釋?zhuān)臃N于上述雞胚，易感動(dòng)物或組織培養中，經(jīng)一定時(shí)間后，觀(guān)察細胞或雞胚病變，如絨毛尿囊膜上產(chǎn)生痘斑或尿囊液有血凝特性，或易感動(dòng)物發(fā)病而死亡等，經(jīng)統計學(xué)方法計算出50%感染量或50%組織細胞感染量，可獲得比較準確的病毒感染性滴度。 3.病毒形態(tài)與結構的觀(guān)察病毒懸液經(jīng)高度濃縮和純化后，借助磷鎢酸負染及電子顯微鏡可直接觀(guān)察到病毒顆粒，根據大小、形態(tài)可初步判斷病毒屬那一科。
還可用分子生物學(xué)技術(shù)分析病毒核酸組成、基因組織構、序列同源性比較加以鑒定。 4.血清學(xué)鑒定用已知的診斷血清來(lái)鑒定。
補體結合試驗可鑒定病毒科屬；中和試驗或血凝搗蛋制試驗可鑒定病毒種、型及亞型。從病人檢材中分離出病毒株，應結合臨床癥狀，檢材來(lái)源及流行季節等加以綜合分析，并應注意混雜病毒、隱性感染或潛伏病毒的混淆，須用病人急性期與恢復期雙份血清作血清學(xué)試驗，血清抗體滴度有≥4倍以上增高，才有意義。
以上是我對于這個(gè)問(wèn)題的解答，希望能夠幫到大家。
5.鱉病的病毒性病原的分離與鑒定有哪些方法
分離病毒的方法很多，這里介紹一種比較簡(jiǎn)單的方法。
①解剖病鱉，取肝、脾、腎等內臟器官，用滅菌生理鹽水洗2-3次后，剪碎，勻槳機勻漿，含800-1000國際單位/毫升青霉素、鏈霉素的Hank's液，制成10%-20%的組織懸液，再以2000轉/分鐘離心10-20分鐘；取上清液，使其通過(guò)0.2微米的細菌濾器除菌。 ②取濾液接種健康鱉，觀(guān)察動(dòng)物是否出現與自然發(fā)病相似的癥狀。
若出現相似癥狀，可證明該鱉病為病毒性疾病。但要鑒定為何種病毒，需要繼續進(jìn)行電鏡觀(guān)察和特定的生理生化實(shí)驗，確定其核酸類(lèi)型和生物學(xué)特征。
③對常見(jiàn)病毒可進(jìn)行血清學(xué)實(shí)驗、PCR鑒定或免疫學(xué)鑒定等。
6.目前病毒分離培養的主要方法是哪一種
1.動(dòng)物接種
這是最原始的病毒培養方法。常用的動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠百、兔和猴等，接種的途徑有鼻內、皮下、皮內、腦內、腹腔內、靜脈等。根據病毒種類(lèi)不同，選擇敏感動(dòng)物及適宜接種部位。
2.雞胚接種雞胚對多種病度毒敏感。根據病毒種類(lèi)不同，可將標本接種于雞胚的羊膜腔、尿囊腔、卵黃囊或絨毛尿囊膜上。
3.組織培養
將離體活組織塊或分散的活細胞加回以培養，統稱(chēng)為組織培養。組織培養法有三種基本類(lèi)型：器官培養、移植培養和細胞培養。細胞培養最常答用于培養病毒，根據細胞的來(lái)源，染色體特性及傳代次數又可分為下列類(lèi)型：原代和次代細胞培養，二倍體細胞株和傳代細胞系。
7.流感病毒如何分離鑒定
流感患者標本的采集與處理
1. 發(fā)病三日內的急性期患者，用15ml肉湯或Hanks液反復嗽口或咽嗽2~3分鐘，然后吐入試管中，亦可經(jīng)裝有二層紗布的無(wú)菌小漏斗過(guò)濾入試管中。
2. 將咽嗽液置于4℃冰箱中約20分鐘，待顆粒物質(zhì)充分沉淀后，吸上清液約2-5ml置另一無(wú)菌試管，加入抗菌素，使每毫升標本中含青霉素1000單位、鏈霉素1000微克。
3. 混勻后置4℃冰箱內保存備用，24小時(shí)內使用。
生物幫上面有相關(guān)問(wèn)題的詳細資料，蛋白定量
