細菌純培養方法(細菌培養的方法)
1.細菌培養的方法有哪些
根據培養細菌的目的和培養物的特性培養方法分為一般培養法、二氧化碳培養法和厭氧培養法三種。
1、一般培養法：將已接種過(guò)的培養基，置37℃培養箱內18-24小時(shí)，需氧菌和兼性厭氧菌即可于培養基上生長(cháng)。少數生長(cháng)緩慢的細菌，需培養3-7天直至一個(gè)月才能生長(cháng)。
為使培養箱內保持一定濕度，可在其內放置一杯水。培養時(shí)間較長(cháng)的培養基，接種后應將試管口塞棉塞后用石臘凡士林封固，以防培養基干裂。
2、二氧化碳培養法：某些細菌，如牛流產(chǎn)布氏桿菌和胎兒弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空氣中才能生長(cháng)，尤其是初代分離培養要求更為嚴格。將已接種的培養基置于二氧化碳環(huán)境中進(jìn)行培養的方法即二氧化碳培養法，
3、厭氧培養法：常用的厭氧培養方法有厭氧罐法、氣袋法及厭氧箱三種。
擴展資料：
培養時(shí)應根據細菌種類(lèi)和目的等選擇培養方法、培養基，制定培養條件（溫度、pH值、時(shí)間，對氧的需求與否等）。
一般操作步驟為先將標本接種于固體培養基上，做分離培養。再進(jìn)一步對所得單個(gè)菌落進(jìn)行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應鑒定。培養基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。
一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18~24小時(shí)生長(cháng)。厭氧菌則需在無(wú)氧環(huán)境中放2~3天后生長(cháng)。個(gè)別細菌如結核菌要培養1個(gè)月之久。
通過(guò)日常管理、檢測、檢查，了解光合細菌的生長(cháng)情況，就可以結合當時(shí)環(huán)境條件的變化進(jìn)行分析，找出影響光合細菌生長(cháng)繁殖的原因，采取相應的措施。影響光合細菌生長(cháng)的原因很多，內因是菌種是否優(yōu)良，外因是光照、溫度、營(yíng)養、敵害和厭氣程度等。
溫度、光照和pH值都能影響著(zhù)光合細菌的生長(cháng)，而且溫度、光照和pH值之間是互相制約的，溫度與光照的強弱是對立統一的，所以光合細菌生長(cháng)的最適條件應是互應的，即溫度高，光照應弱；溫度低，光照應強。
如果是溫度高，光照強，pH值就會(huì )迅速升高，培養基產(chǎn)生沉淀，抑制光臺細菌的生長(cháng)；如果溫度低，光照弱，光合細菌得不到最佳能源，生長(cháng)速度也慢。經(jīng)試驗得出光合細菌生長(cháng)的最適條件是：
①溫度15~20℃時(shí)，光照30000~50000lx，培養基pH值為7.0;
②溫度25~30℃時(shí)，光照為3000~5000lx，培養基的pH值為7.0。
參考資料來(lái)源：搜狗百科——細菌培養
2.獲得微生物純培養的方法及特點(diǎn)
一、固體培養基分離
1、稀釋倒平板
特點(diǎn)：菌落分離較為均勻，進(jìn)行微生物計數結果相對準確。但操作相對麻煩，熱敏感菌有時(shí)易被燙死，而嚴格好氧菌也可能因被固定在培養基中生長(cháng)受到影響。
2、涂布平板法
特點(diǎn)：操作相對簡(jiǎn)單，是較常使用的常規方法。但有時(shí)會(huì )因涂布不均勻使某些部位的菌落不能分開(kāi)，進(jìn)行微生物計數時(shí)需對稀釋和涂布過(guò)程的操作特別注意，否則不易得到準確的結果。
3、平板劃線(xiàn)法
特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，多用于對已有純培養的確認和再次分離。
應用：這三種方法可用于所有能在固體培養基表面形成菌落的微生物的純培養分離。并且，通過(guò)選用適當的選擇平板及培養條件，可直接分離各種具有特定生理特征的微生物。和厭氧罐或厭氧手套箱技術(shù)結合，這3種方法也可用于獲得各種厭氧菌的純培養。
4、稀釋搖管法
特點(diǎn)：稀釋倒平板法的一種變通形式，但由于菌落形成在瓊脂柱的中間，觀(guān)察和挑取都相對困難。
應用：在缺乏專(zhuān)業(yè)的厭氧操作設備的情況下對嚴格厭氧菌進(jìn)行分離和觀(guān)察。
二、液體培養基分離
1、稀釋法
特點(diǎn)：工作量大，是否獲得純培養需依靠統計學(xué)的推測。
應用：不能或不易在固體培養基上生長(cháng)的微生物進(jìn)行純培養分離或數量統計。
2、富集培養
特點(diǎn)：一般不能直接獲得微生物的純培養，在通過(guò)富集培養使原本在自然環(huán)境中占少數的微生物的數量大大提高后，需再通過(guò)平板法進(jìn)行相應微生物純培養的分離和檢測。
應用：
(1)根據某種微生物的特殊生長(cháng)要求，按照意愿從自然界中對這種微生物進(jìn)行有針對性的有效分離；
(2)分離培養出由科學(xué)家設計的特定環(huán)境中能生長(cháng)的微生物，盡管我們并不知道什么微生物能在這種特定的環(huán)境中生長(cháng)。
三、顯微操作
單細胞（孢子）挑取
特點(diǎn)：分離過(guò)程直觀(guān)，可靠，但對儀器和操作技術(shù)要求較高，多限于高度專(zhuān)業(yè)化的科學(xué)研究。而挑取的微生物單細胞或孢子需經(jīng)固體或液體培養基培養后才能獲得其純培養物。
應用：從樣品中直接分離所需的微生物細胞或孢子，獲得其純培養。
3.微生物分離和純培養技術(shù)有哪些
微生物的培養方式
1.分批培養（batchculture）將微生物置于一定容積的培養基中，經(jīng)培養，最后一次收獲，謂分批培養。在分批培養中，培養基一次加入，不予補充，不再更換。由于營(yíng)養消耗，代謝產(chǎn)物積累，對數生長(cháng)期不能長(cháng)期維持。
2.連續培養（continuous culture）在培養器中不斷補充新鮮營(yíng)養物質(zhì)，并不斷排出部分培養物（包括菌體和代謝產(chǎn)物），以保持長(cháng)時(shí)間生長(cháng)狀態(tài)的一種培養方式。主要有恒濁連續培養和恒化連續培養兩類(lèi)。恒濁連續培養通過(guò)不斷調節流速，使培養液濁度保持恒定，因而可不斷提供具有一定生理狀態(tài)的細胞，并可得到以最高生長(cháng)速率進(jìn)行生長(cháng)的培養物。恒化連續培養通過(guò)控制恒定的流速使營(yíng)養物濃度基本恒定，從而使微生物保持恒定的生長(cháng)速率。用不同濃度的限制性營(yíng)養物進(jìn)行恒化培養，可得到不同生長(cháng)速率的培養物。
3.半連續培養（semi-continuous culture）在發(fā)酵罐中的一部分發(fā)酵液保留下來(lái)作為菌種液，放出其余部分進(jìn)入提練加工工序，在剩余的培養液中加滿(mǎn)新的未接種的培養液，繼續培養，如此反復，謂之半連續培養。
4.補料分批培養（fed-batch culture）補料分批培養又稱(chēng)半分批培養，是指在分批培養過(guò)程中，間歇或連續地補加新鮮培養液，但不取出培養物。待培養到適當時(shí)期，將其從反應器中放出，從中提取目的生成物（菌體或代謝產(chǎn)物）。若放出大部分培養物后，繼續進(jìn)行補料培養，如此反復進(jìn)行，則稱(chēng)為重復補料分批培養（repeated fed-batch culture）。與傳統分批發(fā)酵相比，補料分批發(fā)酵的優(yōu)點(diǎn)在于使發(fā)酵系統中的基質(zhì)濃度維持在低水平，這有以下優(yōu)點(diǎn)：①可除去快速利用碳源的阻遏效應，并維持適當的菌體濃度，以減輕供氧矛盾；②避免有毒代謝物的抑菌作用；③大為減少了無(wú)菌操作要求十分嚴格的接種的次數。與連續發(fā)酵相比，補料分批培養不會(huì )產(chǎn)生菌種老化和變異等問(wèn)題。故其應用范圍十分廣泛。
5.同步培養 能使培養的微生物處于較一致的，生長(cháng)發(fā)育在同一階段上的培養方法叫同步培養法。利用同步培養法控制細胞的生長(cháng)，使它們處于同一生長(cháng)階段，所有細胞都能同時(shí)分裂，這種生長(cháng)方式叫同步生長(cháng)（圖3—4）。用同步培養法得到的培養物叫同步培養物（synchronous culture）。這樣，群體和個(gè)體行為一致，即可用研究群體的方法來(lái)研究個(gè)體水平上的問(wèn)題。由于同步群體的個(gè)體差異，同步生長(cháng)往往最多維持2個(gè)~3個(gè)世代，然后又逐步變?yōu)殡S機生長(cháng)。
青島海博生物技術(shù)有限公司，主要從事生物、醫學(xué)及相關(guān)領(lǐng)域的產(chǎn)品技術(shù)研究、開(kāi)發(fā)和銷(xiāo)售，涉及分子生物學(xué)、生物化學(xué)、醫用診斷試劑以及各種微生物、檢驗用培養基等諸多方面。
海博生物技術(shù)有限公司現有產(chǎn)品：干燥培養基、顯色培養基、常規檢驗培養基、藥典培養基、植物組織培養基、運送培養基、臨床檢驗培養基、動(dòng)物疫苗培養基、一次性平板等。
干燥培養基：有600多個(gè)品種，采用法國進(jìn)口原料制作， 質(zhì)量穩定、特異性好，并在不斷開(kāi)發(fā)新產(chǎn)品。
支原體培養基：由于質(zhì)量穩定、特異性好，廣泛用于全國各大醫院和皮膚病專(zhuān)科醫院，得到用戶(hù)的一致好評。
顯色培養基：生產(chǎn)金黃葡萄球菌顯色培養基、大腸桿菌顯色培養基、大腸菌群顯色培養基、大腸桿菌和大腸菌群二合一顯色、李斯特氏菌顯色培養基、0157菌顯色培養基、弧菌顯色培養基、坂崎桿菌顯色培養基等。
生化試劑：經(jīng)營(yíng)多種生化試劑，品種齊全，質(zhì)量保證。
4.微生物的培養方法有哪些
1905年，德國微生物學(xué)家科赫因對結核桿菌和結核菌素的研究取得重大成就而榮獲諾貝爾獎金。
他發(fā)明固體培養基，用它分離培養細菌，創(chuàng )造細菌的純粹培養法。他又改進(jìn)細菌染色法，為研究細菌的形態(tài)和結構創(chuàng )造有利條件。
荷蘭科學(xué)家E.C.翰遜教授研究使啤酒發(fā)酵的酵母，創(chuàng )造單細胞的純粹培養法。以后，又有人采用純粹培養法選擇適當酵母，用于啤酒的工業(yè)生產(chǎn)，為純粹培養法在工業(yè)發(fā)酵上的應用開(kāi)辟了道路。
翰遜的學(xué)生哈斯發(fā)現，當時(shí)用的由明膠制成的固體培養基很容易發(fā)生液化現象，使用時(shí)有困難。哈斯的妻子建議用瓊脂代替明膠，獲得了較好的效果。
這種瓊脂培養基被后人采用，一直沿用到今天。后來(lái)又有人創(chuàng )造一種培養皿，可供微生物平板分離用。
從此以后，分離出的微生物日益增多，新的微生物不斷被發(fā)現。這樣，可供工業(yè)用的微生物也日益充實(shí)起來(lái)，一支微生物生力軍異軍突起。
5.“細菌培養”的具體培養步驟是什么
以光合細菌培養方法為例。光合細菌培養的方法，按次序分為容器、工具的消毒， 培養基的制備，接種和培養管理四個(gè)步驟。
（一）容器、工具的消毒參考、此處從略。
（二）培養基的制備
1.培養用水
如果培養的光合細菌是淡水種，菌種培養可用蒸餾水，生產(chǎn)培養可用消毒的自來(lái)水（或井水）配制。如果培養的光合細菌是海水種，則用天然海水配制培養基，注意在海水中加入磷元素時(shí)，不能用 磷酸氫二鉀，應用 磷酸二氫鉀，不然會(huì )產(chǎn)生大量沉淀。
2.滅菌和消毒菌種培養用的培養基應連同培養容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養可把配好的培養液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂白粉（或漂白液）消毒后使用。
3. 培養基配制根據所培養種類(lèi)的營(yíng)養需要選擇合適的培養基配方。按培養基配方把所需物質(zhì)稱(chēng)量，逐一溶解，混合，配成培養基。也可先配成母液，使用時(shí)按比例加入一定的量即可。
（三）接種培養基配好后，應立即進(jìn)行接種。光合細菌生產(chǎn)性培養的按種量比較高，一般為20%~50%，即菌種 母液量和新配 培養液雖之比為1∶4~1∶1，不應低于20%，尤其是微氣培養，接種量更應高些，否則光合細菌在培養液中很難占絕對優(yōu)勢，影響培養的最終產(chǎn)量和質(zhì)量。
（四）培養管理光合細菌的培養過(guò)程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長(cháng)情況的觀(guān)察、檢查以及出現問(wèn)題的分析處理等三個(gè)方面。
根據臨床初步診斷及待檢細菌的種類(lèi)，可選用不同環(huán)境條件進(jìn)行培養。常用的有需氧培養法、二氧化碳培養法和厭氧培養法。為了提高檢驗的正確率，同一標本常同時(shí)采用兩種或三種不同的培養法。
（一）需氧培養法
本法是臨床細菌室最常用的培養方法，適于一般需氧和兼性厭氧菌的培養。將已接種好的平板、斜面和液體培養基等，置于35℃溫箱中孵育18~24h，一般細菌可于培養基上生長(cháng)，但有些難以生長(cháng)的細菌需培養更長(cháng)的時(shí)間才能生長(cháng)。另外，有的細菌最適生長(cháng)溫度是28℃~30℃，如鼠疫耶爾森菌，甚至在4℃也能生長(cháng)，如李斯特菌。
（二）二氧化碳培養法
有些細菌初次分離培養時(shí)須置5%~l0%C02環(huán)境才能生長(cháng)良好，如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，牛布魯菌等。常以下列方法供給C02。
1.二氧化碳培養箱：是一臺特制的培養箱，既能調節C02的含量，又能調節所需的溫度。C02從鋼瓶通過(guò)培養箱的C02，運送管進(jìn)入培養箱內，調節好所需C02，濃度自動(dòng)控制器后，將接種好的培養基直接放入培養箱中培養即可。此法適于大型實(shí)驗室應用。
2.燭缸法：將已接種好的培養基置干燥器內，并放入點(diǎn)燃的蠟燭。干燥器蓋的邊緣涂上凡士林，蓋上蓋子，燭光經(jīng)幾分鐘后自行熄滅，此時(shí)干燥器內C02含量約占5%~l0%，然后將干燥器放入35℃溫箱內培養。培養時(shí)間一般為18~24h，少數菌種需培養3~7天或更長(cháng)。
3.化學(xué)法：按每升容積加入碳酸氫鈉0.49和濃鹽酸0.35ml的比例，分別置于容器內。將容器連同接種好的培養基都放人干燥器內，蓋緊干燥器的蓋子，傾斜容器使濃鹽酸與碳酸氫鈉接觸生成C02。
（三）厭氧培養法
適用于專(zhuān)性厭氧菌和兼性厭氧菌的培養。常用的厭氧培養法有：①皰肉培養基法；②焦性沒(méi)食子酸法；③厭氧罐法；④氣袋法；⑤厭氧手套箱法。
6.細菌分離培養的基本要領(lǐng)和常用方法有哪些
一、基本要領(lǐng)
菌種分離主要在培養皿上進(jìn)行，常用的方法是稀釋法和劃線(xiàn)法。
菌種分離的目的是是微生物的一個(gè)個(gè)體通過(guò)繁殖，在固體培養基上長(cháng)出肉眼能見(jiàn)的群體，然后根據培養特征，用接種針調取所需菌種并在顯微鏡下檢查，證明為單一形狀的菌體。
改變培養基條件也有助于菌種分離。沒(méi)有一種培養基或一種培養條件能夠滿(mǎn)足一切微生物生長(cháng)的需要，在一定程度上所有的培養基都是選擇性的。
如果某種微生物的生長(cháng)需要是已知的，也可以設計特定環(huán)境使之適合這種微生物的生長(cháng)，因而能夠從混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養出來(lái)，盡管在混雜的微生物群體中這種微生物可能只占少數。
二、方法
1、稀釋倒平板法
首先把微生物懸液作一系列的稀釋?zhuān)ㄈ?:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分別取不同稀釋液少許，與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻后，傾入滅過(guò)菌的培養皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時(shí)間即可出現菌落。
如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個(gè)菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。
2、涂布平板法
因為將微生物懸液先加到較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且采用稀釋倒平板法也會(huì )使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長(cháng)，因此在微生物學(xué)研究中常用的純種分離方法是涂布平板法。
其做法是先將已熔化的培養基倒入無(wú)菌平皿，制成無(wú)菌平板，冷卻凝固后，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無(wú)菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個(gè)平板表面，經(jīng)培養后挑取單個(gè)菌落。
3、平板劃線(xiàn)法
最簡(jiǎn)單的分離微生物的方法是平板劃線(xiàn)法，即用接種環(huán)以無(wú)菌操作沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行連續劃線(xiàn)，微生物細胞數量將隨著(zhù)劃線(xiàn)次數的增加而減少，并逐步分散開(kāi)來(lái)，如果劃線(xiàn)適宜的話(huà)，微生物能一一分散，經(jīng)培養后，可在平板表面得到單菌落。
有時(shí)這種單菌落并非都由單個(gè)細胞繁殖而來(lái)的，故必須反復分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次作“由點(diǎn)到線(xiàn)”稀釋而達到分離目的的。劃線(xiàn)的方法很多，常見(jiàn)的比較容易出現單個(gè)菌落的劃線(xiàn)方法有斜線(xiàn)法、曲線(xiàn)法、方格法、放射法、四格法等。
4、稀釋搖管法
用固體培養基分離嚴格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露于空氣中不立即死亡，可以采用通常的方法制備平板，然后置放在封閉的容器中培養，容器中的氧氣可采用化學(xué)、物理或生物的方法清除。
對于那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養的分離則可采用稀釋搖管培養法進(jìn)行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。
先將一系列盛無(wú)菌瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)嚬苎杆贀u動(dòng)均勻，冷凝后，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養基和空氣隔開(kāi)。
培養后，菌落形成在瓊脂柱的中間。進(jìn)行單菌落的挑取和移植，需先用一只滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一只毛細管插入瓊脂和管壁之間，吹入無(wú)菌無(wú)氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養皿中，用無(wú)菌刀將瓊脂柱切成薄片進(jìn)行觀(guān)察和菌落的移植。
擴展資料
在以上介紹的幾種方法中，平板分離法普遍用于實(shí)驗室微生物的分離與純化，稀釋法是液體培養基分離純化常用的方法。
一般情況下可以通過(guò)適當改善培養基的條件來(lái)培養特點(diǎn)菌種。
如為了得到嗜熱微生物，可在50℃~60℃下進(jìn)行培養。有時(shí)投加相應的抑制劑也能提高菌種分離效果，如在土壤樣品的懸浮液中投加10%的苯酚數滴，可以抑制霉菌和細菌的生長(cháng)，而有利于放線(xiàn)菌的分離。在培養基中投加一定量的青霉素或鏈霉素能抑制細菌的生長(cháng)，而有利于霉菌的分離。
參考資料來(lái)源：搜狗百科-菌種分離
7.微生物獲得純培養的方法理論依據是什么
微生物純培養的方法
一、固體培養基分離
1、稀釋倒平板
特點(diǎn)：菌落分離較為均勻，進(jìn)行微生物計數結果相對準確。但操作相對麻煩，熱敏感菌有時(shí)易被燙死，而嚴格好氧菌也可能因被固定在培養基中生長(cháng)受到影響。
2、涂布平板法
特點(diǎn)：操作相對簡(jiǎn)單，是較常使用的常規方法。但有時(shí)會(huì )因涂布不均勻使某些部位的菌落不能分開(kāi)，進(jìn)行微生物計數時(shí)需對稀釋和涂布過(guò)程的操作特別注意，否則不易得到準確的結果。
3、平板劃線(xiàn)法
特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，多用于對已有純培養的確認和再次分離。
應用：這三種方法可用于所有能在固體培養基表面形成菌落的微生物的純培養分離。并且，通過(guò)選用適當的選擇平板及培養條件，可直接分離各種具有特定生理特征的微生物。和厭氧罐或厭氧手套箱技術(shù)結合，這3種方法也可用于獲得各種厭氧菌的純培養。
4、稀釋搖管法
特點(diǎn)：稀釋倒平板法的一種變通形式，但由于菌落形成在瓊脂柱的中間，觀(guān)察和挑取都相對困難。
應用：在缺乏專(zhuān)業(yè)的厭氧操作設備的情況下對嚴格厭氧菌進(jìn)行分離和觀(guān)察。
二、液體培養基分離
1、稀釋法
特點(diǎn)：工作量大，是否獲得純培養需依靠統計學(xué)的推測。
應用：不能或不易在固體培養基上生長(cháng)的微生物進(jìn)行純培養分離或數量統計。
2、富集培養
特點(diǎn)：一般不能直接獲得微生物的純培養，在通過(guò)富集培養使原本在自然環(huán)境中占少數的微生物的數量大大提高后，需再通過(guò)平板法進(jìn)行相應微生物純培養的分離和檢測。 應用：
(1)根據某種微生物的特殊生長(cháng)要求，按照意愿從自然界中對這種微生物進(jìn)行有針對性的有效分離；
(2)分離培養出由科學(xué)家設計的特定環(huán)境中能生長(cháng)的微生物，盡管我們并不知道什么微生物能在這種特定的環(huán)境中生長(cháng)。
三、顯微操作
單細胞（孢子）挑取
特點(diǎn)：分離過(guò)程直觀(guān)，可靠，但對儀器和操作技術(shù)要求較高，多限于高度專(zhuān)業(yè)化的科學(xué)研究。而挑取的微生物單細胞或孢子需經(jīng)固體或液體培養基培養后才能獲得其純培養物。 應用：從樣品中直接分離所需的微生物細胞或孢子，獲得其純培養。
