目前補體測定的方法(補體測定法)
1.補體有哪些測定法
(1)液相法：先將同位素標記的C1q與滅活過(guò)的血清標本混合作用，再加入0.5%（終濃度）的PEG將結合了C1q的CIC沉淀下來(lái)，通過(guò)檢測沉淀物中的放射活性來(lái)計算CIC的含量。
（2）固相法：先將C1q吸附于固相載體表面，加入待檢血清使CIC與C1q結合，再加入同位標記的或酶標記的抗人IgG或SPA，最后檢測其放射活性或酶活性。 （3）C1q偏離試驗：先將同位素標記的C1q與滅活的血清標本混合，再加抗體致敏的綿羊紅細胞，溫育后離心，檢測紅細胞上的放射活性。
紅細胞的放射活性與免疫復合物的量呈負相關(guān)。
2.如何檢測補體的存在
補體測定 第一節 補體的性質(zhì)與活化途徑 一、補體的性質(zhì) 補體（complement,C）：是一組存在于人和脊椎動(dòng)物（vertebrates）血清及組織液中具有酶樣活性、不耐熱和功能上連續反應的糖蛋白，是抗體發(fā)揮溶細胞作用的必要補充條件，故稱(chēng)為補體。
補體系統的功能：廣泛參與機體的抗感染防御反應，介導細胞溶解，調理吞噬，免疫黏附，參與炎癥反應引起機體免疫損傷等 補體按其性質(zhì)與功能分為三類(lèi)，即 ? ①補體系統的固有成分，共9種，按先后次序分別命名為C1-C9 ②調節和控制補體系統活化的成分，多以其功能命名，如C1抑制物 ③補體受體（CR），以其結合對象來(lái)命名 二、補體的活化途徑 經(jīng)典途徑 替代途徑 MBL途徑 （一）補體激活的經(jīng)典途徑 是以IgG(1,2,3)或IgM類(lèi)抗體結合抗原后的免疫復合物為主要激活劑，激活過(guò)程從C1q開(kāi)始，補體C1~C9共11種成分全部參與的活化途徑。二）補體激活的替代途徑 補體激活的替代途徑又稱(chēng)旁路途徑，與經(jīng)典途徑不同之處在于激活與抗原體復合物 無(wú)關(guān)，是非特異性的，沒(méi)有c1,c4和c2參與，直接激活c3，完成c5~c9的激活過(guò)程 血清總補體活性測定（CH50試驗） （一）實(shí)驗原理 補體最主要的活性是溶細胞作用，這種活性很容易通過(guò)溶血反應進(jìn)行檢測。
在一個(gè)適當的、穩定的反應系統中，溶血反應對補體的劑量依賴(lài)呈一個(gè)特殊的S形曲線(xiàn)。在輕微溶血和接近完全溶血時(shí)，補體量的變化不能使溶血程度有顯著(zhù)改變，即溶血對補體量的變化不敏感。
但在半溶血（50%溶血）上下時(shí)曲線(xiàn)最陡，即使補體含量?jì)H有較小變動(dòng)時(shí)，溶血程度也會(huì )發(fā)生較大的改變，也就是說(shuō)對補體量的變化非常敏感。故采用50%溶血作為終點(diǎn)指標要比100%溶血敏感得多，這一方法稱(chēng)為補體50%溶血（complement hemolysis 50%），簡(jiǎn)稱(chēng)為CH50。
二）試驗方法1、綿羊RBC：濃度一般為2%~5%2、溶血素：即抗綿羊RBC抗體，試驗前應在56℃加熱30min或60 ℃加熱30min以滅活補體3、稀釋緩沖液：磷酸緩沖液或巴比妥緩沖液4、50%溶血標準管：5、取新鮮血清標本進(jìn)行試驗。按的要求在各管中加入試劑和反應物，一起放37℃水浴箱中溫育30min。
溫育后將所有試管2500r/min離心5min，通過(guò)觀(guān)察比較，選擇溶血程度與標準管相近的兩管在分光光度計上分別讀取吸光度，以最接近標準管的那一管定為最高有效反應管，取其稀釋倍數代入下列公式，求得CH50的測定值（單位U）。每毫升血清總補體活性（單位）= 1/血清用量*稀釋倍數 三）方法評價(jià) CH50試驗測定的是經(jīng)典途徑總補體溶血活性，所反應的是補體9種成分的綜合水平。
方法簡(jiǎn)便、快速，但敏感性低，補體的溶血活性除與試驗中反應體積成反比外，還與反應所用緩沖液的pH、離子強度、鈣鎂濃度、SRBC數量和反應溫度有一定關(guān)系。鈣鎂離子可穩定溶血系統，但過(guò)量反而抑制溶血反應。
單個(gè)補體成分的測定 一、免疫溶血法 二、免疫化學(xué)法 補體結合試驗 補體結合試驗（complement fixation test,CFT）是用免疫溶血機制做指示系統，來(lái)檢測另一反應系統抗原或抗體的試驗。早在1906年Wasermann就將其應用于梅毒的診斷，即著(zhù)名的華氏反應。
這一傳統的試驗經(jīng)不斷改進(jìn)，除了用于傳染病診斷和流行病學(xué)調查以外，在一些自身抗體、腫瘤相關(guān)以原以及HLA的檢測和分析中也有應用。一、試驗原理 該試驗中有5種成分參與反應，分屬于3個(gè)系統： ①反應系統，即已知的抗原（或抗體）與待測的抗體（或抗原）；②補體系統；③指示系統，即SRBC與相應溶血素，試驗時(shí)常將其預先結合在一起，形成致敏紅細胞。
反應系統與指示系統爭奪補體系統，先加入反應系統給其以?xún)?yōu)先結合補體的機會(huì )。二、試驗方法 補體結合試驗的改良方法較多，較常用的有全量法（3ml）、半量法（1.5ml）、小量法（0.6ml）和微量法（塑板法）等。
目前以后兩種方法應用較為廣泛，因為可以節省抗原，血清標本用量較少，特異性也較好。以下敘述以小量法為例，即抗原、抗體、溶血素、羊紅細胞各加0.1ml，補體加0.2ml，總量為0.6ml。
（一）試劑1.抗原：試驗中用于檢測抗體的抗原應適當提純，純度愈高，特異性愈強。如使用粗制抗原時(shí)，須經(jīng)同樣處理的正常組織作抗原對照，以識別待檢血清中可能存在的、對正常組織成分的非特異性反應。
2.抗原和抗本的滴定：補體結合試驗中，抗原與抗體按一定比例結合，因而應通過(guò)試驗選擇適宜的濃度比例。多采用方陣法進(jìn)行滴定，選擇抗原與抗體兩者都呈強陽(yáng)性反應（100%不溶血）的最高稀釋度作為抗原和抗體的效價(jià)（單位）。
3、補體的滴定：一般用豚鼠補體，補體滴定9逐步加入各試劑，溫育后觀(guān)察最少量補體能產(chǎn)生完全溶血者，確定為1個(gè)實(shí)用單位，正式試驗中使用2個(gè)實(shí)用單位。（二）血清標本 采集血液標本后及時(shí)分離血清，及時(shí)檢驗或將血清保存于-20℃。
血清在試驗前應先加熱56℃30min（或60℃3min）以破壞補體和除去一些非特異因素。血清標本遇有抗補本現象時(shí)可做下列處理之一：①加熱提高12 ℃ ；②-20℃凍融后離心去沉淀；③以3mmol/L鹽酸處理；④加入少量補體后再加熱滅活；⑤以白陶土處理；⑥通入CO2；⑦以小白鼠肝粉處理；⑧用含10%新鮮雞蛋。
