中藥研制的方法(中藥藥理研究的具體方法)
1.中藥藥理研究的具體方法
1 血清藥理學(xué)方法學(xué)研究 在中藥藥理學(xué)研究中，有相當一部分藥理活性實(shí)驗和作用機理是在體外進(jìn)行的，而利用中藥粗提物直接進(jìn)行體外實(shí)驗，其結果的真實(shí)性和可靠性都受到很大影響。
中藥血清藥理學(xué)研究方法是指給動(dòng)物經(jīng)口用藥后一定的時(shí)間采血，取含藥血清進(jìn)行體外實(shí)驗的一種研究方法，該方法由日本學(xué)者田代真一提出，95年前后國內即陸續開(kāi)展。國家自然科學(xué)基金委員會(huì )曾于1996年資助重點(diǎn)項目：中藥復方體外實(shí)驗的方法學(xué)研究，在含藥血清藥理作用強度與體內給藥的量效關(guān)系研究、給藥方案研究、反應體系中含藥物血清加入量的確定、采血時(shí)間的確定及時(shí)效關(guān)系研究、含藥血清低溫保存和血清滅活對效應的影響等方面做了大量卓有成效的工作。
在以含頭風(fēng)飲（川芎、天麻為主）藥物血清抗血小板釋放5-HT和阻滯內皮細胞鈣通 道作用為指標的實(shí)驗中證實(shí)：在一定范圍內，動(dòng)物給藥量與吸收入血的藥物量及含藥血清的體外藥理效應呈正相關(guān)〔1〕；含藥血清的藥物濃度除與給藥劑量有關(guān)外，還與給藥方案 （如一日內給藥次數及給藥天數等）直接相關(guān)〔2〕；體外實(shí)驗體系中含藥血清加入量 的多少對藥理效應產(chǎn)生明顯的影響，因而對最佳反應體系的探索具有重要意義〔3〕 ；在采用血清藥理學(xué)方法進(jìn)行實(shí)驗前，進(jìn)行時(shí)效關(guān)系研究，找出給藥后最佳采血時(shí)間是十分 必要的〔4〕；含藥血清低溫保存和血清滅活可能對藥理效應產(chǎn)生明顯影響，應以使 用新鮮血清或保存時(shí)間較短的血清 為宜〔 5〕。鑒于目前多數中藥或復方有效成分尚不明確，成為制約中藥現代研究的瓶頸，近年 進(jìn)行了中藥血清藥化學(xué)與血清藥理學(xué)協(xié)同研究的嘗試，以揭示產(chǎn)生藥效的物質(zhì)基礎。
提出在 建立血清化學(xué)成分指紋圖譜并測定相應含藥血清藥理效應強度后，進(jìn)行藥物效應成分分析， 如果含藥血清的藥理效應強度與其血清指紋圖譜中某成分指紋峰大小相一致，則說(shuō)明該成分 與所觀(guān)察藥理作用密切相關(guān)〔6〕。中藥血清藥理學(xué)針對中藥及其復方復雜多樣的化 學(xué)成分的特點(diǎn)，結合化學(xué)、微生物學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科的先進(jìn)技術(shù)手段，將有可能成為 中藥藥理學(xué)研究的一種新的方法體系。
2 單味藥藥理研究 常用單味中藥藥理研究是中藥藥理研究的重要內容。近年仍以對整體動(dòng)物 藥理效應觀(guān)察及對器官、組織、細胞的影響等為主，現代生物技術(shù)如分子生物學(xué)研究方法 也受到廣泛關(guān)注和應用。
研究的藥味相對集中，以補益藥、活血化瘀藥居多，不少常用中藥 的新藥理作用機理被揭示。 研究發(fā)現黃芪對自然衰老大鼠腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體3個(gè)腦區降低的M膽堿受體和M1亞型受體密度有顯著(zhù)的上調作用，并可調節老年大鼠血漿環(huán)核苷酸含量〔7〕；衰老大鼠心肌 β受體密度及T3、T4、皮質(zhì)醇含量均降低，黃芪、人參、枸杞子可 升高之〔8,9〕；對肝硬化大鼠存在的下丘腦血管加壓素系統異常有改善作用 〔10〕；可以明顯提高腎病綜合征大鼠血漿白蛋白水平，改善腎小球濾過(guò)率和尿鈉排泄 〔11〕；對環(huán)磷酰胺所致免疫功能抑制小鼠細胞毒活性有顯著(zhù)增強作用，并可能 通過(guò)調控巨噬細胞C1q的分泌功能來(lái)增強免疫和抗腫瘤作用〔12,13〕；還發(fā)現 黃芪煎劑及含黃芪小鼠血清均對小鼠脾淋巴細胞增殖、混合淋巴細胞培養反應及IL-2的產(chǎn)生有促進(jìn)作用〔14〕。
冬蟲(chóng)夏草水提液能降低正常心肌細胞內Ca2+ 的濃度，減輕缺氧再給氧時(shí)細胞內Ca2+超載現象，并明顯減輕缺氧再給氧時(shí)細胞 內脂質(zhì)過(guò)氧化〔15,16〕。紅參在預防高血壓性視網(wǎng)膜動(dòng) 脈硬化起重要作用，能使內皮細胞膜的光整性、細胞器的結構及內皮細胞分泌各種血管舒縮 物質(zhì)保持正常，抑制平滑肌細胞的異常增生，還有擴張血管、減少外周阻力及調節血壓的作 用〔17〕。
生地黃可明顯抑制皮質(zhì)酮致“陰虛”模型小鼠巨噬細胞Ia抗原 的高水平表達，降低其提呈抗原能力，從而表現出一定的免疫抑制作用〔18〕。丹參注射液可明顯降低缺血再灌注引起的大鼠腦水腫，減少腦皮層及海馬組織丙二醛含量，提高過(guò)氧化氫酶、超氧化物歧化酶活性和還原型谷胱甘肽、三磷酸腺苷的含量〔19〕。
3 有效部位、有效單體藥理研究 隨著(zhù)中藥化學(xué)成分提取、分離技術(shù)的進(jìn)步，中藥藥理學(xué)與中藥化學(xué)學(xué)科結合更為密切， 中藥 有效部位、有效單體的藥理研究日益增多。近年研究涉及的有效部位和有效單體有數十種， 研究較多、較深入的有人參皂甙、雷公藤多甙、三七皂甙、淫羊藿總黃酮、川芎嗪、天花粉 蛋白、牛膝多糖、地黃多糖等。
有效部位、有效單體藥理作用的深入研究，有助于揭示中藥 治療疾病的機理。研究發(fā)現，人參皂甙對輻射引起的細胞膜損傷有防護作用〔20〕 ；人參二醇皂甙對心肌缺血再灌注犬心臟功能具有保護作用〔21〕；人參根總皂甙 具有明顯抗DNA損傷及抗突變效應〔22〕；人參皂甙Rb1對應激性性行為低下有保護 作用，其機制可能與抑制應激動(dòng)物血漿皮質(zhì)酮升高和提高睪酮水平有關(guān)〔23〕。
雷 公藤多甙具有抗炎和免疫抑制作用，能顯著(zhù)降低人工晶體表面、虹膜和睫狀體的炎癥反應 〔24,25〕；對哮喘豚鼠肺組織的磷脂酶A2有明顯抑制作用 〔26〕。三七總皂甙顯著(zhù)提高心肌細胞內肌漿網(wǎng)膜鈣泵活性，減少心肌細胞Ca2 +〔27〕，對犬心肌缺。
2.中藥是怎樣制造的
你指的是中藥飲片還是中成藥呢？它們都可以稱(chēng)為中藥的，中藥飲片多數是植物藥經(jīng)采摘后凈化，除去泥土雜質(zhì)，根據不同要求切片，切斷或切絲，干燥后使用，或應用不同的炮制方法炒等制作而成的。
中成藥制劑用不同的萃取方法比如滲漉法，回流法等方法提取藥物的有效成分，去除雜質(zhì)，根據制劑的不同，加入不同的添加劑，例如制成顆粒劑，需將提取的藥液經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)機器霧化，噴出的藥霧經(jīng)快速干燥成型變成小顆粒，也有一種機器將干燥的藥物切削稱(chēng)小顆粒，如制成片劑則是在提取藥物有效成分后按照規定的制劑標準加入淀粉，糊精等輔料，經(jīng)機器壓制成統一規格的片劑。
3.中藥的分類(lèi)方法有哪些
中草藥的種類(lèi)很多，根據近年的初步統計，總數約在八千種左右，常用中草藥亦有700種左右。如此繁多的種類(lèi)必須按照一定的系統，分門(mén)別類(lèi)，才便于習、研究和應用。藥物分類(lèi)的方法是根據人們對于藥物認識的逐漸深化而不斷發(fā)展的。例如我國最早的藥書(shū)——《神農本草經(jīng)》把當時(shí)常用的365種藥物按照毒性強弱和用藥目的不同分成上、中、下三品：上品是延年益壽藥，無(wú)毒，多服久服不傷人，中品是防病補虛藥，有毒無(wú)毒，根據用量用法而定；下品是治病愈疾的藥物，多有毒性，不可久服。這種分類(lèi)方法簡(jiǎn)單而粗糙，其中有些藥物的分類(lèi)也不一定恰當。但當時(shí)，可能在避免因用錯藥物而中毒的問(wèn)題上是起到了一定作用的。梁代陶弘景編《本草經(jīng)注》時(shí)，增藥365種，分為玉石、草、木、果菜、米食、有名未用六類(lèi)，每類(lèi)又各分上、中、下三品，這是根據藥物自然屬性進(jìn)行分類(lèi)的開(kāi)端，但仍較粗糙。直到明代李時(shí)珍編《本草綱目》一書(shū)，分類(lèi)方法始有重大的發(fā)展。他采用了根據以前本草的分類(lèi)方法略加修改，把藥物分為水、火、土、石、草、谷、菜、果、木、器、蟲(chóng)、鱗、介、禽、獸、人等十六部外，又把各部的藥物按照其生態(tài)及性質(zhì)分為六十類(lèi)。例如草部分為山草、芳草、隰草、毒草、蔓草、水草、石草、苔、雜草等。而且他還往往把親緣相近或相同科屬的植物排列在一起，例如草部之四、隰草類(lèi)中的53種藥物中，有21種屬于菊科，而且其中10種是連排在一起的。這種分類(lèi)方法有助于藥材原植物（或動(dòng)物）的辨認與采收，對于澄清當時(shí)許多藥材的混亂情況起了很大作用。現代記載中草藥的科書(shū)所采用的分類(lèi)方法，根據其目的與重點(diǎn)而有不同，主要有下列四種：
1按藥物功能分類(lèi)——如解毒藥、清熱藥、氣藥、活血化瘀藥等。
2按藥用部分分類(lèi)——如根類(lèi)、葉類(lèi)、花類(lèi)、皮類(lèi)等。
3按有效成分分類(lèi)——如含生物堿的中草藥、含揮發(fā)油的中草藥、含甙類(lèi)的中草藥等。
4按自然屬性和親緣關(guān)系分類(lèi)——先把中草藥分為植物藥、動(dòng)物藥和礦物藥。動(dòng)植物藥材再根據其原植物原動(dòng)物的親緣關(guān)系來(lái)分類(lèi)和排列次序。如麻黃科、木蘭科、毛莨科等等。
上述各種分類(lèi)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，究竟以采用那一種分類(lèi)方法比較適宜，主要取決于我們的目的和要求。例如按藥物功能分類(lèi)，有利于習和研究中草藥的作用和用途，按藥用部分分類(lèi)便于習和比較各類(lèi)藥材的外部形態(tài)和內部構造，因而有利于藥材的性狀鑒定和顯微鑒定；按有效成分分類(lèi)有利于習和研究中草藥的有效成分及其化鑒定。采用按藥材自然屬性和親緣關(guān)系分類(lèi)的方法，這是由于同科屬的中草藥在外部形態(tài)，內部構造、化成分和療應用等方面往往有很多相似之處。采用這種分類(lèi)方法不但便于習和研究這些共同點(diǎn)，也便于比較它們的特異點(diǎn)，以揭示其規律性，這樣，既有利于中草藥的鑒定也有利于從同科屬動(dòng)植物中尋找含有相同或類(lèi)似成分的動(dòng)植物，以擴大藥物資源。
4.藥品研發(fā)中的最關(guān)鍵的技術(shù)有哪些及其理由
藥品研發(fā)主要包括化學(xué)藥合成、中藥及生物。其研發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)各不相同，以下簡(jiǎn)單列舉：
1.化藥
主要是確定疾病篩選好對其有效的結構式，用各種化學(xué)反應來(lái)獲得需要的結構。這需要對化學(xué)的基本知識和操作手段非常了解；關(guān)鍵技術(shù)就是合成工藝及制劑。
2.中藥
中藥的開(kāi)發(fā)主要設計：
1）對中成藥來(lái)說(shuō)首先是對該方子進(jìn)行驗證，按中醫君臣佐使等等配伍方面的知識進(jìn)行論證，看是否符合辯證要求；
2）接下來(lái)就是一般的流程，包括提取、分離、純化。所謂提取，也就是根據藥材里面所含的，所需的有效成分，用一系列的化學(xué)手段將之提取出來(lái)，一般是萃取或者水提、酒提等，工業(yè)上一般多用酒精，因為酒精無(wú)毒且容易濃縮回收，這個(gè)時(shí)候提取出來(lái)的為粗浸膏；還要進(jìn)一步的分離出較純的成分，一般是用硅膠柱柱等進(jìn)行分離；當所需的有效成分達到75%以上的含量后就可以用重結晶，或者再次過(guò)過(guò)硅膠柱獲得純度較高的成分；
3）獲得單體后要進(jìn)行結構鑒定；
4）制劑
添加輔料，制成膠囊、口服液、片劑等等劑型。
5）包裝設計
6）申報
按國家藥品注冊申報要求，一般做三期臨床，獲得生產(chǎn)批件后就可以進(jìn)行生產(chǎn)銷(xiāo)售了。
中藥關(guān)鍵技術(shù)就是工藝和制劑，另外有些中藥成分不穩定，制劑比較困難。
3. 生物制品
這不是很清楚，但大致相似。
現在藥品研發(fā)最困難的就是受政策限制，原則上功效、劑型較同類(lèi)藥品無(wú)明顯優(yōu)勢的藥品是不受理的，研發(fā)出藥品還得跟蹤政策上的調整，以免投入卻沒(méi)有結果。總之，藥品研發(fā)風(fēng)險很大，受制于技術(shù)、市場(chǎng)和政策，之前的調研工作一定要細致到位。藥品研發(fā)其中涉及的方面非常多，如中藥開(kāi)發(fā)，首先還要解決起資源問(wèn)題等等了。藥品研發(fā)總的關(guān)鍵技術(shù)其實(shí)就是工藝、制劑和申報時(shí)的政策了。由于篇幅有限，設計面太廣，沒(méi)有特定的對象也只能簡(jiǎn)單說(shuō)點(diǎn)。。
5.中藥藥丸制作的方法有哪些
以八珍丸為例黨參100g白術(shù)100g茯苓100g甘草100g當歸100g白芍100g川參100g熟地黃100g（一）制法1.以上八味粉碎成細粉過(guò)80目篩備用。
2.煉蜜：稱(chēng)取一定量的蜂蜜于蒸發(fā)皿中加熱至沸（如有雜質(zhì)可過(guò)濾），繼續煉制成煉蜜程度，撈去漂浮的泡沫帶有光澤即可。 3.合藥：將已煉制好的煉蜜與藥粉按比例進(jìn)行混合（藥粉與煉蜜的比例一般為1:1或1:5也有不足1:1的，要根據藥物性質(zhì)及季節不同而異。
一般含糖類(lèi)、油脂類(lèi)的中草藥用蜜少。含纖維素較多和質(zhì)地疏松的藥物用蜜量多。
夏季用蜜量少，冬季用蜜量多。均勻地揉合，做成像面團樣丸塊（在攪拌機中機械混合或在其它容器中人工混合）。
合藥時(shí)，蜂蜜一般趁熱加入（如含有膠質(zhì)，樹(shù)脂或揮發(fā)性成分需待煉蜜稍冷后再加入混合），充分和勻，使其內外全部滋潤，色澤一致，軟硬適中，能隨意捏塑即可。4.制條，成丸。
將合好的面團樣軟材放置一定時(shí)間，使藥料與蜂蜜成分混合滋潤，并產(chǎn)生一定粘性后即可搓條，搓條要粗細一致，外表光滑。 即可用手工或制丸板做成一定量的、光滑的、園球形丸粒，大量生產(chǎn)可用機械制丸。
制丸時(shí)，先將藥團塊稱(chēng)重，以便分計量準確，即按每次所需制成丸粒的數目與每丸的總量進(jìn)行計算，按計算量稱(chēng)取團塊再搓條，制成預計數目的丸粒，搓丸條的虛詞可依丸粒大小來(lái)定，丸條搓好后再分割成小段，再搓圓成球形即可。 為避免藥團粘手和粘器具，操作時(shí)可用適量的潤滑劑。
潤滑劑可用甘油或麻油（花生油）500g，蜂蠟95g，加熱熔化而成。夏季蜂蠟可適當多加一點(diǎn)。
5.包裝與貯藏：制成的蜜丸，可采用蠟紙、玻璃紙、塑料袋、蠟殼包好，并注明品名、批號、規格，貯存于陰涼干燥處。
6.中藥藥理的研究?jì)热?/h2>
中藥藥理學(xué)研究主要包括主要藥效學(xué)研究和一般藥理學(xué)研究。
中藥新藥主要藥效學(xué)研究應遵循中醫藥理論，運用現代科學(xué)方法，制定具有中醫藥特色的試驗計劃，根據新藥的功能主治，選用或建立與中醫“證”或“病”相符或相近的動(dòng)物模型和試驗方法，對新藥的有效性做出科學(xué)的評價(jià)。主要藥效學(xué)研究包括下面幾個(gè)方面。
中藥藥理學(xué) （1）主要藥效學(xué)研究設計依據和要求中藥具有成分復雜，藥理作用廣泛的特點(diǎn)，在實(shí)驗設計時(shí)應根據新藥主治（病或證），參考其功能，選擇能夠反映其療效本質(zhì)的主要藥效進(jìn)行重點(diǎn)研究；間接證實(shí)其藥效的輔助試驗可酌情選作，要分清主次。如主治風(fēng)濕痹證（類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節炎）的新藥，應以免疫性關(guān)節腫、細胞免疫和鎮痛作用為主要試驗，特別是免疫性關(guān)節炎為重中之重。
如新藥對二型膠原（常用不完全性佐劑代替）性關(guān)節炎的繼發(fā)腫脹沒(méi)有抑制作用，其他試驗結果再明顯也是沒(méi)有用的。此外、主要藥效試驗應從多方面進(jìn)行論證，至少應選用兩種或兩種以上模型加以證實(shí)，且以整體試驗為主。
要求實(shí)驗方法可靠、技術(shù)先進(jìn)、操作規范、結果可信。（2）選擇實(shí)驗方法藥理實(shí)驗方法主要分為在體試驗和體外試驗兩大類(lèi)。
兩者互相補充，可以從不同角度，不同深度研究中藥新藥藥效。兩種方法各有所長(cháng)。
體外試驗包括離體器官、組織、細胞、酶、受體、細胞內信息及基因等實(shí)驗。其可以按要求嚴格控制實(shí)驗條件，具有重復性好，用藥量少、節省動(dòng)物等優(yōu)點(diǎn)，且可排出體內神經(jīng)體液等各種復雜因素的干擾，可進(jìn)行直接觀(guān)察，獲得準確結果。
所得結果較易分析。在1、5、7類(lèi)中藥新藥的研制中，因含雜質(zhì)較少，可以配合一定的體外試驗。
但在進(jìn)行體外試驗時(shí)，應充分估計到中藥粗制劑中雜質(zhì)和理化性質(zhì)對實(shí)驗結果的影響，如藥液的酸堿度、各種電解質(zhì)和鞣質(zhì)等的干擾，所得結果常常不能反映臨床療效。例如在試管內抗菌作用較強的中藥，常常在體內不一定表現出強大的抗菌作用；某些中藥含有大量鉀離子、鈣離子，其粗制劑在麥氏浴槽中表現出對離體平滑肌、心肌有明顯的藥理活性，但口服后不一定產(chǎn)生相應作用。
體內試驗也稱(chēng)在體試驗，其比較接近于臨床狀態(tài)，適于綜合性研究，所得結果較為可信，可以直接反映臨床療效。中醫藥學(xué)以整體思想體系為基礎，重視宏觀(guān)調控。
中藥具有多成分多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，整體試驗能較全面的反映藥物的作用。特別是中藥新藥2類(lèi)藥材、6類(lèi)復方制劑大多屬粗制劑，更應強調以體內試驗為主。
要證實(shí)新藥具有某種藥理作用必須通過(guò)體內試驗證明有效。體外試驗僅起輔助作用。
具體試驗方法請參考相關(guān)方法學(xué)書(shū)籍。近年來(lái)開(kāi)展的中藥血清藥理試驗方法是一種新的體外試驗方法，其將受試藥物經(jīng)口給與動(dòng)物后，取其血清作為藥源加入體外反應系統中研究其藥理作用。
此種方法盡管目前仍存在很多問(wèn)題，尚待解決，但對中藥粗制劑的體外試驗具有重要價(jià)值。嚴格說(shuō)來(lái)，采用血清藥理試驗方法，給藥方案需要進(jìn)行大量的預試驗，才能找出最佳給藥方案。
給藥方案包括給藥劑量，每天給藥次數，連續給藥時(shí)間，給藥后采血時(shí)間以及血清中所含相關(guān)活性物質(zhì)的滅活條件。李氏根據近些年來(lái)所掌握中藥有效成分大量藥代動(dòng)力學(xué)數據，提出通法如下：將受試藥物每天給藥兩次，連續給藥3天，末次給藥后1小時(shí)采血；給藥劑量為臨床等效劑量。
按此通法方案進(jìn)行，理論上中藥或其復方所含80%以上的成分于給藥后1小時(shí)處于達到或接近峰值。血清中活性物質(zhì)對所含藥物作用有干擾，如何排出干擾是一項十分復雜的問(wèn)題。
一般排出酶活性及補體干擾，常采用56℃條件下放置30min，這是最簡(jiǎn)便的方法。但不能列為通法。
因為干擾因素不同，排出干擾的條件差異會(huì )很大。（3）選擇動(dòng)物模型和指標研究藥物的作用僅僅在正常動(dòng)物身上進(jìn)行還不夠，還需要制備各種動(dòng)物病理模型，因為病理模型模擬疾病狀態(tài)，比正常機體更接近病人的機能狀態(tài)，有些藥理作用在正常動(dòng)物身上觀(guān)察不到，如抗胃粘膜損傷藥，抗菌、抗病毒藥，抗惡性腫瘤藥，解熱、鎮痛、抗炎藥等均必須在相應的病理模型上才能觀(guān)察到相應的作用。
因此，病理模型在新藥研究中占有重要地位。病理模型的選擇應首選符合中醫臨床證或病的動(dòng)物模型。
如研究補虛藥對免疫功能的影響，應首選免疫功能低下的虛癥模型，按照中醫辯證施治原則“虛則補之”，凡是正氣虛衰病人，才有免疫功能低下表現，用補益藥可使其免疫功能增強。進(jìn)一步根據藥物類(lèi)型，選擇相應病理模型。
如治療脾虛癥的新藥，宜選用脾虛癥的動(dòng)物模型，治療血虛證的新藥，應選擇血虛證的動(dòng)物模型。但目前制造完全模擬中醫病或證的病理模型尚有困難。
現有模型與臨床證候相距甚遠，故研究中藥新藥也常常采用一般化學(xué)藥物所常用的病理模型，如高血壓、糖尿病、中風(fēng)、冠心病、肝炎、肝硬化等病理模型。觀(guān)察指標應選用特異性強、敏感性高、重現性好、客觀(guān)、定量或半定量的指標進(jìn)行觀(guān)察。
如在治療冠心病心絞痛的中藥新藥進(jìn)行療效研究時(shí)，制備心肌缺血模型時(shí)，可供選擇的方法很多，其中以阻斷小型豬或犬冠狀動(dòng)脈所致的局限性心肌缺血模型與臨床更為相似，較為合理，且可定位、定量、。
