細胞融合的方法(細胞融合的基本原理和方法)

1.細胞融合的基本原理和方法

(1)病毒誘導助融

其實(shí)， 細胞融合在自然界是存在的， 細胞融合研究首先也是基于自發(fā)的細胞融合。1 9 5 7

年， 岡田善雄意外發(fā)現仙臺病毒（ H vJ ） ， 能誘導懸液中艾氏腹細胞融合。然后H ar ri s 、

K a d a 等用于誘導種間細胞融合， 獲得成功。

(2)化學(xué)助融

1 9 7 2 年， 卡爾森首先用硝酸鈉進(jìn)行煙草兩個(gè)種的細胞原生質(zhì)體的融合， 1 9 7 4 年Kao等首先發(fā)現PEG （ 聚乙二醇） 能誘導植物細胞原生質(zhì)體融合產(chǎn)生雜交細胞。1975年P(guān)entecorvo。發(fā)現PE G 亦能幫助哺乳類(lèi)動(dòng)物細胞的融合， 1 9 7 6 年D a vi d s o n 更進(jìn)一步證實(shí)這一結果， 并且認為其具有簡(jiǎn)單快速、高效率等優(yōu)點(diǎn)。因而， 75 年之后聚乙二醇就逐漸取代了仙臺病毒。

(3)電融合法

電融合法是70 年代未期和80 年代初期發(fā)展起來(lái)的一種新的細胞融合方法。Senda (1970)

首先應用電脈沖， 通過(guò)微電極在顯微鏡下使植物細胞融合， 奠定電融合技術(shù)基礎

(4)激光誘導卵細胞融合

激光誘導卵細胞融合是最新的細胞融合方法。該法為張聞迪（ 1 9 8 8 ） 等人首先應用。他們利用激光微束的單色性、高功率密度、短脈寬和極小的作用范圍等特點(diǎn)。對泥鰍受精卵進(jìn)行

融合試驗， 獲得成功， 且融合后的細胞可存活發(fā)育， 經(jīng)卵裂期、囊胚期、原腸期、孵化期、

直至幼魚(yú)。整個(gè)過(guò)程可通過(guò)顯微鏡觀(guān)察， 還可同時(shí)由電視攝象監視器觀(guān)察和進(jìn)行照相記錄

2.4、誘導細胞融合的方法有哪些

(1)物理融合的機制

20世紀80年代發(fā)明了電融合技術(shù)。此方法是先將兩種原生質(zhì)體以適當的比例制成細胞懸液，將其滴入電融合小室中，給小室兩極以交變電流，使原生質(zhì)體沿電場(chǎng)方向聚集成串珠狀，接著(zhù)給以瞬間高強度的電脈沖，使原生質(zhì)體膜產(chǎn)生局部破損而融合。

(2)化學(xué)融合的機制

現通常使用聚乙二醇（PEG）作為融合劑。PEG可以破環(huán)細胞間相互排斥的表面作用力，從而使相鄰細胞聚集而促進(jìn)融合。另外，化學(xué)融合方法還有高pH高Ca2+法，其基本原理是中和原生質(zhì)體表面所帶電荷，使原生質(zhì)體的質(zhì)膜緊密接觸，從而有利于質(zhì)膜的接觸融合。

(3)滅火病毒誘導的細胞融合的機制

此方法適用于動(dòng)物細胞的融合。通常使用滅火的仙臺病毒。利用滅火的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)重新排布，細胞膜打開(kāi)，細胞發(fā)生融合。在誘導細胞發(fā)生融合前，必須先用紫外線(xiàn)將病毒滅火，再稀釋到一定濃度后加入到細胞懸液中誘導細胞融合。

3.植物細胞融合有哪些方法

細胞膜打開(kāi)。

化學(xué)和物理方法可造成膜脂分子排列的改變： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用， 但是并不破壞這些病原體的抗原結構

=======================

這里的病毒肯定不會(huì )死亡的， 細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布， 細胞發(fā)生融合，在恢復過(guò)程中便可誘導相接觸的細胞發(fā)生融合.，去掉作用因素之后.

滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細菌失去感染能力.，稱(chēng)誘發(fā)融合..只是滅活， 但是保留了他能夠使細胞融合的特性.

=======================（其他資料）

異種間的細胞必須經(jīng)誘導劑處理才能融合，質(zhì)膜恢復原有的有序結構滅活病毒誘導細胞融合的原理是， 使細胞相互凝聚

4.細胞融合的融合方法

同種細胞在培養時(shí)2個(gè)靠在一起的細胞自發(fā)合并，稱(chēng)自發(fā)融合；異種間的細胞必須經(jīng)誘導劑處理才能融合，稱(chēng)誘發(fā)融合。

仙臺病毒法融合

①兩種細胞在一起培養，加入病毒，在4℃條件下病毒附著(zhù)在細胞

膜上。并使兩細胞相互凝聚；

②在37℃中，病毒與細胞膜發(fā)生反應，細胞膜受到破環(huán)，此時(shí)需

要Ca2+和Mg2+，最適PH為8.0一8.2;

②細胞膜連接部穿通，周邊連接部修復，此時(shí)需Ca2+和ATP;

④融合成巨大細胞，仍需ATP。

聚乙二醇（PEG）法

聚乙二醇（PEG）結構為：HOH2C(CH20CH2)nCH2OH，分子量大于200小于6000者均可用作細胞融合劑。PEG經(jīng)高壓滅菌后，與溫熱的Engle氏液混合。一般選用分子量為4,000，常用濃度為50%,pH8.0~pH8.2（用10%NaHCO3調整），分子量小的PEG，融合效應差，又有毒性，分子量過(guò)大，則粘性太大，不易操作。

電融合法

在直流電脈沖的誘導下，細胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進(jìn)而質(zhì)膜開(kāi)始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。

優(yōu)點(diǎn)：融合率高、重復性強、對細胞傷害小；

裝置精巧、方法簡(jiǎn)單、可在顯微鏡下觀(guān)察或錄像觀(guān)察融合過(guò)程；

免去PEG誘導后的洗滌過(guò)程、誘導過(guò)程可控性強。

離心振動(dòng)

物理方法之一，使用離心機等機器實(shí)現細胞之間的融合。