二、紅細胞標本問(wèn)題 未加入抗體或血清 實(shí)驗溫度(37℃凝集會(huì )下降) 未識別溶血 血清與紅細胞比例不當 離心速度、時(shí)間不夠 使用失效或錯誤試劑 實(shí)驗結果記錄、解釋錯誤 離心速度過(guò)大、時(shí)間過(guò)長(cháng) 使用了受到細菌污染的試劑 試驗器皿不干凈 實(shí)驗結果記錄、解釋錯誤 患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的紅細胞,如骨髓移植患者,或非O型人接受O型紅細胞 某些ABO基因變異的個(gè)體或ABO亞型紅細胞,一些白血病或其他惡性疾病患者的紅細胞ABO抗原太弱,應用抗-A、抗-B試劑未能出現預期的凝集反應 紅細胞獲得性或遺傳性的異常,如獲得性B抗原紅細胞或Tn/T多凝集紅細胞,人血清抗-A、抗-B試劑可能與這些異常的紅細胞反應 使用未洗滌的紅細胞標本,其表面黏附的血漿或血清中含針對抗-A、抗-B試劑中染色劑或其他成分的抗體,出現假陽(yáng)性反應 患者血清中高活性、高濃度冷自身抗體嚴重致敏(包被)自身紅細胞,以至自發(fā)地發(fā)生凝集,而不是抗體試劑的特異性免疫反應所致 紅細胞表面包被IgG類(lèi)抗體 三、血清標本的問(wèn)題 小的纖維蛋白凝集的紅細胞凝塊被誤認為是血液凝集,如使用血漿標本或未完全去除纖維蛋白的血清標本時(shí)。
免疫抑制疾病患者血清中ABO抗體減少或消失。老年人ABO抗體減弱 4-6月齡內嬰兒血清中ABO抗體陰性或很弱,一般只測正定 血清中不正常濃度和比例的蛋白質(zhì)成分或高分子蛋白增多可引起非特異凝集,如緡錢(qián)狀紅細胞的非特異凝集。
血清中含抗-A、抗-B以外的其他紅細胞抗體,如抗-M、抗-I等。 患者接受了ABO血型不同的骨髓移植 患者血清中含有針對紅細胞保護劑的抗體 大量C 1分子由于異常高效價(jià)的補體結合抗體抗-A、抗-B作用,結合到紅細胞膜上,遮蔽了A、B抗原位點(diǎn),不發(fā)生凝集 四、分析和處理 1.重新采集標本,以避免采集、標記、污染等錯誤 2.查詢(xún)患者既往病史、輸血史、用藥史、骨髓移植史 3.徹底洗滌標本或試劑紅細胞 4.應用抗-AB、抗-A1、或抗-H檢測紅細胞 5.分析抗篩結果,確定結果是否受同種異型或自身冷抗體干擾 6.室溫孵育30min后,離心觀(guān)察結果,以檢測弱的抗原抗體反應 7. 做自身紅細胞做對照,以確定自身抗體的干擾 意外的血清學(xué)反應所致的ABO正反定不符 抗體太弱或消失 非正常高濃度的抗-A、抗-B可引起前帶現象 A2、A2B或其他ABO亞型人血清中可能有抗-A1 患者血漿蛋白濃度過(guò)高或靜脈輸用了大量大分子藥物等原因,可發(fā)生類(lèi)似凝集現象,如緡錢(qián)狀凝集 冷自身抗體,如抗-I、抗-IH、抗-IA等 自身免疫性溫型抗體 同種抗體/意外抗體 五、ABO正反定不符及其處理 1.抗體太弱或消失 如新生兒、老年人、免疫抑制患者,應注意患者的年齡和診斷 2.非正常高濃度的抗-A、抗-B可引起前帶現象,導致假陰性,將血清稀釋或用EDTA(2.5%)處理可消除 3.A2、A2B或其他ABO亞型人血清中可能有抗-A1, 抗-A1只凝集A1型紅細胞而不凝集A2、O型紅細胞 4.患者血漿蛋白濃度過(guò)高或靜脈輸用了大量大分子藥物等原因,可發(fā)生類(lèi)似凝集現象,如緡錢(qián)狀凝集 將血清用生理鹽水稀釋3倍或用鹽水替換技術(shù)可消除 5.冷自身抗體,如抗-I、抗-IH、抗-IA等(自凝) a.所有試劑及細胞37℃孵育,37℃下判讀結果 b.將冷自身抗體吸收 c.將血清用0.01mol/L DTT處理和再定型 6.自身免疫性溫型抗體 自身免疫性溶血性貧血病人血清中可有溫型自身抗體,37℃反應比室溫強 血清能凝集自身和其他各型紅細胞,若紅細胞上吸附自這種自身抗體,在自身或他人血清中均可出現凝集,正定被誤認為AB型,反定被誤認為O型。
用遞增溫度(22℃,37℃,45℃)洗滌紅細胞后再做血型鑒定 7.同種抗體/意外抗體 室溫下抗-P、抗-M、抗E等,可能出現意外反應,干擾ABO血型鑒定 抗體特異性抗體鑒定,選擇抗原陰性的紅細胞做反定。
這個(gè)問(wèn)題由武漢新啟迪生物來(lái)為您解答。做ELISA實(shí)驗,在處理樣本前應該先了解收集樣本的注意事項。【標本收集注意事項】
收集血液的試管應為一次性的無(wú)熱原,無(wú)內毒素試管。
2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。
3.標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。
4.標本收集后若不及時(shí)檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內,避免反復凍融。
5.可根據標本的實(shí)際情況,做適當倍數稀釋?zhuān)ńㄗh做預實(shí)驗,以確定稀釋倍數) 。
6.收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實(shí)驗失敗,重復實(shí)驗時(shí)標本缺失,從而耽誤實(shí)驗進(jìn)程。
7.收集標本時(shí),應該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
8.樣本處理應該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。</ol>;樣本正確的處理方法應該是這樣的:
【標本處理辦法】
血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過(guò)夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離
心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)
保存。
3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過(guò)洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
4.細胞培養上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃3-6個(gè)月)保存。</ol>;注:樣品稀釋的一般原則
用戶(hù)須查閱相關(guān)文獻了解標本內待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的最佳檢測范圍。樣品的稀釋?xiě)性敿氂涗洝OM梢越o您提供幫助,祝您科研順利!
血流感染是一種嚴重的全身感染性疾病,早期快速診斷并及時(shí)治療對患者預后至關(guān)重要。
血培養是目前診斷血流感染最直接和最可靠的方法,血培養標本質(zhì)量的好壞直接影響診斷的準確性,故在血液標本采集過(guò)程中應掌握如下要點(diǎn)。(1) 采血時(shí)機:盡可能在患者寒戰開(kāi)始時(shí),發(fā)熱高峰前30~60分鐘內采血;在使用抗菌藥物治療前采集血液標本,如患者已經(jīng)使用抗菌藥物治療,應在下一次用藥之前采集血標本。
臨床往往存在經(jīng)驗性用藥后病情未得到緩解時(shí)才會(huì )考慮血培養,但是由于已經(jīng)應用了廣譜抗菌藥物,細菌大多被殺滅或抑制,血培養結果往往為“無(wú)細菌生長(cháng)”,因此,掌握正確的采血時(shí)機至關(guān)重要。(2) 采血部位:通常為肘靜脈。
切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采血;不應從留置靜脈或動(dòng)脈導管內取血,除非懷疑有導管相關(guān)的血流感染,因為導管常伴有定植菌存在。 (3) 采血工具:建議采用商業(yè)化的真空血培養瓶。
如果血培養瓶的儲存溫度為 2~8丈,應先將血培養瓶在室溫放置30分鐘左右,平衡至室溫再采血。同一部位采集兩瓶血培養時(shí)不建議更換針頭。
(4) 采血次數、血培養瓶的選擇:對于成人患者,應同時(shí)分別在兩個(gè)部位采集血標本;每個(gè)部位需氧和厭氧培養各一瓶。 對于兒童患者,應同時(shí)分別在兩個(gè)部位采集血標本,分別注人兒童瓶,一般不需要厭氧瓶,除非懷疑患兒存在厭氧菌血流感染。
(5) 采血量:成人每次每培養瓶應采血5~10ml(合計20~40 ml);嬰幼兒根據患兒的體重確定采血總量,每培養瓶(兒童瓶)采血2~4 ml。 采血量是影響血培養檢出陽(yáng)性率的重要因素,采血量過(guò)少會(huì )明顯降低血培養陽(yáng)性率。
國內大多數醫療機構不能完全做到雙側部位采血、留取雙套血液標本,這不利于血培養陽(yáng)性率的提高。(6) 皮膚、血培養瓶消毒:為減少皮膚、培養瓶口等對血培養造成的污染,在穿刺前,應對皮膚和培養瓶口進(jìn)行消毒并充分干燥,以減少假陽(yáng)性的發(fā)生概率。
(7) 避免采血管內空氣注人厭氧血培養瓶。(8) 避免在靜脈留置導管連接處(如肝素帽處)采集血標本。
避免標本污染。
這個(gè)問(wèn)題由武漢新啟迪生物來(lái)為您解答。
做ELISA實(shí)驗,在處理樣本前應該先了解收集樣本的注意事項。 【標本收集注意事項】 收集血液的試管應為一次性的無(wú)熱原,無(wú)內毒素試管。
2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。 3.標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。
4.標本收集后若不及時(shí)檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內,避免反復凍融。 5.可根據標本的實(shí)際情況,做適當倍數稀釋?zhuān)ńㄗh做預實(shí)驗,以確定稀釋倍數) 。
6.收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實(shí)驗失敗,重復實(shí)驗時(shí)標本缺失,從而耽誤實(shí)驗進(jìn)程。7.收集標本時(shí),應該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
8.樣本處理應該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。樣本正確的處理方法應該是這樣的: 【標本處理辦法】 血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過(guò)夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過(guò)洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。
勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。4.細胞培養上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃3-6個(gè)月)保存。注:樣品稀釋的一般原則 用戶(hù)須查閱相關(guān)文獻了解標本內待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的最佳檢測范圍。
樣品的稀釋?xiě)性敿氂涗洝?希望可以給您提供幫助,祝您科研順利。
采血過(guò)程注意事項
采血而要注意的問(wèn)題包括:采血部位、采血時(shí)患者的體位、止血帶的影響、輸液的影響、抗凝劑的種類(lèi)和量的影響。
1.采血部位
不同采血部位采集的血標本,會(huì )檢測出不同的結果。同一患者同一項目,今天從手指采集血樣,明天從靜脈采集血樣,是不合理的。從同一患者手指、靜脈采集的血標本用于血常規,結果就不一樣。
2.止血帶的影響
止血帶壓迫時(shí)間40秒,總蛋白增加4%、天門(mén)冬氨酸轉移酶(AST)增加16%;超過(guò)3分鐘,局部血液濃縮,血清鐵,血清鈣、酸性磷酸酶(ACP)、血鉀升高,乳酸升高,PH值減低。
3.患者體位
患者在臥位、坐位、立們不同姿勢,護士采集的標本,檢驗結果不同時(shí)。正常人立位血漿總量比臥位減少12%左右,引起紅蛋白(Hb)、白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、紅細胞比容(HCT)、脂類(lèi)、蛋白等值變化。止血時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )引起凝血系統變化,反復攥拳會(huì )使血鉀升高。
采血操作步驟
1. 讓病人坐直或平躺,保持合適的體位,利于護士操作為宜且充分暴露采血部位。
2. 讓病人衣著(zhù)應寬松,袖口不宜過(guò)緊,以免采血后血管仍然充血引起出血或皮下血腫。
3. 記得要叮囑患者“按壓針眼處5-10分鐘”,避免血腫引起醫患糾紛。
4. 避免在患皮膚病、皮膚損傷的部位或有瘢痕的部位抽血,以免引起感染。
注意事項
1. 嚴格無(wú)菌操作技術(shù),徹底消毒皮膚,消毒范圍8~10cm,消毒后手指不得觸摸穿刺部位,采血過(guò)程中采血者須經(jīng)常用乙醇棉球或0.2%過(guò)氧乙酸液浸泡的毛巾擦拭雙手,盡量保持手指無(wú)菌。
2. 采血時(shí)血流不暢應注意查找原因:
①針頭在靜脈內位置不當,針頭斜面被靜脈壁或瓣阻擋;
②穿刺過(guò)深或針頭斜面未全部進(jìn)入靜脈內;
③采血導管被擠壓粘連或彎曲變形;
④止血帶壓力不足或過(guò)高,造成表淺靜脈不充盈或深部靜脈回流受阻;
⑤獻血者精神緊張,出現獻血反應,造成靜脈痙攣或塌陷。針對上述原因作及時(shí)處理,保持血流通暢。
3. 認真核對袋簽、管簽上的編號、姓名和血型是否一致,如有標簽脫落,須從血袋內重新抽血樣復查肝功及血型,結果一致后方可送出。
采血
釋義:
因檢驗或相關(guān)需要,由醫務(wù)人員經(jīng)靜脈、動(dòng)脈采取血液標本的過(guò)程。
方法:
采血由醫護人員并經(jīng)專(zhuān)門(mén)采血技術(shù)培訓的人員來(lái)承擔,未經(jīng)專(zhuān)門(mén)培訓不得上崗;采血技術(shù)的熟練程度,直接關(guān)系到血液的質(zhì)量和獻血者的身體健康,所以要求每位采血人員必須熟練掌握采血技術(shù)。
獻血者的護理
①獻血后,敷蓋在針眼上的棉球、膠布須保留4h以上,以免針眼感染。
②檢查穿刺部位有無(wú)滲血或出血,若有出血應抬高手臂,并繼續壓迫局部。
獻血者的選擇
①年齡 男18~55歲,女18~50歲。超過(guò)此年齡者,如果本人自愿、單位同意、體檢合格、經(jīng)醫師審定后,男女各可放寬5歲。
②身體健康,無(wú)下列病史 病毒性肝炎 (甲型肝炎痊愈1年,經(jīng)3次化驗血陰性者可獻血)、瘧疾(停止治療后3年并無(wú)瘧疾癥狀者可獻血)、血吸蟲(chóng)病(1年前患過(guò)血吸蟲(chóng)病,已痊愈,無(wú)肝、脾腫大,又無(wú)臨床癥狀者可獻血)、肺結核病(已治愈,不再有活動(dòng)性2年之后,可獻血)、性病史或梅毒抗體陽(yáng)性、艾滋病史或HIV抗體陽(yáng)性、惡性腫瘤、重度變態(tài)反應病、精神失常、經(jīng)常頭痛或暈厥、心腦血管疾病、肝腎、血液、內分泌代謝疾病,接受主要臟器切除治療及其他重要病史。
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