分離普通微生物有哪些(細菌的純種分離和接種技術(shù)注意事項有哪些)

1.細菌的純種分離和接種技術(shù)注意事項有哪些

細菌的純種分離和接種技術(shù)中，需要注意的事項有：

1）稀釋度的問題

純種分離的時候，無非是把菌液稀釋一定梯度后，涂布在諸如LB培養(yǎng)基上。如果沒有稀釋好，就會導致細菌長得太密，或者是細菌根本不長。最優(yōu)的稀釋梯度是最后在平板上的菌落數(shù)在30至300之間。此時，能清楚地看清菌落的形態(tài)，便于挑取單菌落；

2）雜菌污染的問題

因為用于接種的一般都是營養(yǎng)豐富的有機培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基適合任何細菌生長。在操作過程中，空氣和桌面上都會有大量看不見的細菌潛在。在分離和接種前，所有用到的器具和培養(yǎng)基必須在121攝氏度下滅菌20分鐘至30分鐘。在倒平板時，最好在培養(yǎng)基還是熱的時候倒，以減少雜菌感染。所有的操作最好在超凈工作臺上完成。若沒有超凈工作臺，那就拿兩個酒精燈點燃，并用酒精擦拭桌面，在兩個酒精燈之間操作。

綜上，想要較好地分離和接種細菌，操作人員必須完全保證雜菌的感染，操作熟練，在溫度和潔凈度上做到最嚴格。

2.進行菌種分離前需要做哪些準備工作?

具體如下：（1） 無菌室和分離用器具的滅菌和消毒分離菌種的操作過 程，應該在很清潔的條件下嚴格按照無菌操作技術(shù)進行，無菌室、無菌箱或潔凈工作臺都應保持清潔，必要時可用0。

1%的升汞溶液 或70%的乙醇擦拭工作臺。微生物一般都是附著在塵埃上、懸浮 于空氣中，可采用在室內(nèi)噴霧或煮沸水的方法，使空氣中水汽飽和，塵埃與水滴同時降落，除去空氣中的微生物。

分離時所用的培養(yǎng)皿、刀剪、接種環(huán)等用具及工作人員的工作服都應進行無菌處理，操作時不能在操作間走動，防止帶來雜菌。（2） 消毒液的配制① 無菌水：無菌水即為高壓滅菌后的自來水。

將適量自來水裝人三角瓶中，塞好棉塞，然后進行髙壓滅菌，水裝人量不宜太多，防止高壓滅菌時弄濕棉塞。 無菌水不應保存時間太久，防止污染。

② 常用的消毒液有以下幾種：0。1%升汞溶液、漂白粉、70%的酒精溶液。

此外，5%福爾馬林、3%過氧化氫、0。1%氰化汞、2%高錳酸鉀、0。

1%硝酸銀等都可用作表面消毒，處理時間和濃度因材料不同而異，處理后都應用無菌水沖洗。 （3） 排除細菌污染細菌污染是分離真菌的大敵，目前抑制細菌生長有效的方法是在培養(yǎng)基中加人適當?shù)目股亍?/p>

加金霉素（30微克/毫升）可抑制多數(shù)細菌生長，加青霉素（2微克/毫升）可抑制革蘭陽性細菌生長，加多黏菌素B(0。5微克/毫升)可抑制革蘭陰性細菌生長，加鏈霉素40微克/毫升和氯霉素50微克/毫升可以抑制大部分細菌生長，除氣霉素可在制作培養(yǎng)基時滅菌前加人外，其他抗生素都應在培養(yǎng)基滅菌后冷卻到45°C左右時再加人。

此外，可調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值，酸性培養(yǎng)基對大部分細菌都有抑制作用，而并不影響真菌生長。

3.畜禽細菌分離培養(yǎng)需要注意什么

1） 嚴格的無菌操作分離培養(yǎng)時的無菌操作包括兩個方面： 一是采取待檢材料時的無菌操作，不論任何待檢材料（包括動物的 組織、體液、分泌物、滲出物、排泄物、詞料或飲水等）必須在無 菌操作下，用滅菌的器械采取，樣品放入滅菌的容器中待檢。

二是 接種培養(yǎng)基時的無菌操作，接種用的器械如接種環(huán)、棉棒或其他用 具，在取材料接種之前必須予以滅菌，接種培養(yǎng)基時，要盡一切可 能防止外界微生物的進人。 2） 創(chuàng)造適合細菌生長發(fā)育的條件一是選擇適宜的培養(yǎng)基， 一般盡可能地多用幾種培養(yǎng)基，包括普通培養(yǎng)基和特殊培養(yǎng)基（如 含有特殊營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基、適于厭氧菌生長的培養(yǎng)基等）。

二是 要考慮細菌所需的大氣條件。對于性質(zhì)不明的細菌材料最好多接種 幾份培養(yǎng)基，分別放在普通大氣、無氧環(huán)境內(nèi)或含有5%?10%二 氧化碳的容器中培養(yǎng)。

三是要考慮培養(yǎng)溫度和時間。一般病原菌放 在37度下培養(yǎng)即可，經(jīng)24?72小時培養(yǎng)后大多數(shù)病原菌都可以生 長出來，少數(shù)須培養(yǎng)較長時間（1?4周）后可見其生長，但要注意 防止培養(yǎng)基變干。