氣相色譜柱使用(氣象色譜的使用及各種注意事項)
1.氣象色譜的使用及各種注意事項
安裝色譜柱： 1.安裝拆卸色譜柱必須在常溫下。
2.填充柱有卡套密封和墊片密封，卡套分三種，金屬卡套，塑料卡套，石墨卡套，安裝時(shí)不易擰的太緊。墊片式密封每次按裝色譜柱都要換新的墊片（島津色譜是墊片密封）。
3.色譜柱兩頭是否用玻璃棉塞好。防止玻璃棉和填料被載氣吹到檢測器中。
4.毛細管色譜柱安裝插入的長(cháng)度要根據儀器的說(shuō)明書(shū)而定，不同的色譜汽化室結構不同，所以插進(jìn)的長(cháng)度也不同。需要說(shuō)明的如果你用毛細管色譜柱采用不分流，汽化室采用填充柱接口這時(shí)與汽化室連接毛細管柱不能探進(jìn)太多，略超出卡套即可。
氫氣和空氣的比例對FID檢測器的影響氫氣和空氣的比例應1:10，當氫氣比例過(guò)大時(shí)FID檢測器的靈敏度急劇下降，在使用色譜時(shí)別的條件不變的情況下，靈敏度下降要檢查一下氫氣和空氣流速。氫氣和空氣有一種氣體不足點(diǎn)火時(shí)發(fā)出“砰”的一聲，隨后就滅火，一般當你點(diǎn)火電著(zhù)就滅，再點(diǎn)還著(zhù)隨后又滅是氫氣量不足。
使用TCD檢測器： 1.氫氣做載氣時(shí)尾氣一定要排到室外。 2.氮氣做載氣橋流不能設大，比用氫氣時(shí)要小的多。
3.沒(méi)通載氣不能給橋流，橋流要在儀器溫度穩定后開(kāi)始做樣前在給。如何判斷FID檢測器是否點(diǎn)著(zhù)火不同的儀器判斷方法不同，有基流顯示的看基流大小，沒(méi)有基流顯示的用帶拋光面的扳手湊近檢測器出口，觀(guān)察其表面有無(wú)水汽凝結。
如何判斷進(jìn)樣口密封墊是否該換進(jìn)樣時(shí)感覺(jué)特別容易，用TCD檢測器不進(jìn)樣時(shí)記錄儀上有規則小峰出現，說(shuō)明密封墊漏氣該更換。更換密封墊不要擰的太緊，一般更換時(shí)都是在常溫，溫度升高后會(huì )更緊，密封墊擰的太緊會(huì )造成進(jìn)樣困難，常常會(huì )把注射器針頭弄彎。
如何選擇合適的密封墊密封墊分一般密封墊和耐高溫密封墊，汽化室溫度超過(guò)300℃時(shí)用耐高溫密封墊，耐高溫密封墊的一面有一層膜，使用時(shí)帶膜的面朝下。怎樣防止進(jìn)樣針不彎很多做色譜分析工作的新手常常會(huì )把注射器的針頭和注射器桿弄彎，原因是： 1.進(jìn)樣口擰的太緊，室溫下擰的太緊當汽化室溫度升高時(shí)硅膠密封墊膨脹后會(huì )更緊，這時(shí)注射器很難扎進(jìn)去。
2.位置找不好針扎在進(jìn)樣口金屬部位。 3.注射器桿彎是進(jìn)樣時(shí)用力太猛，進(jìn)口色譜帶一個(gè)進(jìn)樣器架，用進(jìn)樣器架進(jìn)樣就不會(huì )把注射器桿弄彎。
4.因為注射器內壁有污染，注射時(shí)將針桿推彎。注射器用一段時(shí)間就會(huì )發(fā)現針管內靠近頂部有一小段黑的東西，這時(shí)吸樣注射感到吃力。
清洗方法將針桿拔出，注入一點(diǎn)水，將針桿插到有污染的位置反復推拉，一次不行再注入水直到將污染物弄掉，這時(shí)你會(huì )看到注射器內的水變的渾濁，將針桿拔出用濾紙擦一下，再用酒精洗幾次。分析的樣品為溶劑溶解的固體樣時(shí)，進(jìn)完樣要及時(shí)用溶劑洗注射器。
5.進(jìn)樣時(shí)一定要穩重，急于求快會(huì )把注射器弄彎的，只要你進(jìn)樣熟練了自然就快了。提高分離度的幾種方法： 1.增加柱長(cháng)可以增加分離度. 2.減少進(jìn)樣量（固體樣品加大溶劑量）. 3. 提高進(jìn)樣技術(shù)防止造成兩次進(jìn)樣. 4.降低載氣流速. 5.降低色譜柱溫度. 6.提高汽化室溫度. 7.減少系統的死體積，主要是色譜柱連接要插到位，不分流進(jìn)樣要選擇不分流結構汽化室。
8.毛細管色譜柱要分流，選擇合適的分流比.綜上所訴要根據具體情況在實(shí)驗中摸索，比如降低載氣流速、降低色譜柱溫度又會(huì )使色譜峰變寬，因此要看色譜峰型來(lái)改變條件。最終目的是達到分離好，出峰時(shí)間快。
氣相色譜分析是在氣相色譜儀上進(jìn)行的分析，所以分析譜圖的不正常不僅反映人為的原因，更多是儀器上的原因。現代氣相色譜儀都有不同的故障自我診斷功能，可以給出儀器故障的原因，給分析人員極大的方便，但更多的是需要人們去判斷。
為了少出故障和盡快排除故障，人們必須遵循色譜儀安裝調試的要求，并定時(shí)進(jìn)時(shí)檢定]盡量減少操作失誤和儀器故障對分析的干擾。 為了能安全使用和獲得正確的實(shí)驗結果，本文介紹氣相色譜儀在使用中的注意事項及故障的排除以供參考。
氣相色譜儀的安裝要求氣相色譜儀在安裝時(shí)對環(huán)境有一定的要求，具體如下： 1）環(huán)境環(huán)境溫度應在+5~+350C相對濕度<85%。 2）室內應無(wú)腐蝕性氣體，離儀器及氣瓶3m以?xún)炔坏糜须姞t和火種。
3）室內不應有足以影響放大器和記錄儀（或色譜工作站）正常工作的強磁場(chǎng)和放射源。 4）電網(wǎng)電源應為220V（進(jìn)口儀器必須根據說(shuō)明書(shū)的要求提供合適的電壓），電源電壓的變化應在5%~10%范圍內，電網(wǎng)電壓的瞬間波動(dòng)不得超過(guò)5V。
電頻率的變化不得超過(guò)50Hz的1%（進(jìn)口儀器必須根據說(shuō)明書(shū)的要求提供合適的電頻率）。采用穩壓器時(shí)，其功率必須大于使用功率的1.5倍。
5）儀器應平放在穩定可靠的工作臺上，周?chē)坏糜袕娬饎?dòng)源及放射源，工作臺應有1m以上的空間位置。 6）有的氣相色譜儀要求有良好的接地，接地電阻必須滿(mǎn)足說(shuō)明書(shū)的要求（美國規定綠色是地線(xiàn)，黑色是火線(xiàn)，白色是零線(xiàn)；英國規定綠/黃色是地線(xiàn)，褐色是火線(xiàn)，藍色是零線(xiàn)）。
7）氣源采用氣瓶時(shí)，氣瓶不宜放在室內，放室外必須防太陽(yáng)直射和雨淋。 氣相色譜儀故障和操作失誤的排除氣相色譜儀由六大單元組成，任一單元出現問(wèn)題最終都會(huì )反映到色譜圖上。
現代的氣相色譜儀很多都具備故障診斷功能，不同程度地給出儀。
2.氣相色譜柱裝柱過(guò)程中應注意哪些問(wèn)題
1.安裝拆卸色譜柱必須在常溫下。
2.填充柱有卡套密封和墊片密封，卡套分三種，金屬卡套，塑料卡套，石墨卡套，安 裝時(shí)不易擰的太緊。墊片式密封每次按裝色譜柱都要換新的墊片（島津色譜是墊片密封）。
3.色譜柱兩頭是否用玻璃棉塞好。防止玻璃棉和填料被載氣吹到檢測器中。
4.毛細管色譜柱安裝插入的長(cháng)度要根據儀器的說(shuō)明書(shū)而定，不同的色譜汽化室結構不同，所以插進(jìn)的長(cháng)度也不同。需要說(shuō)明的如果你用毛細管色譜柱采用不分流， 汽化室采用填充柱接口這時(shí)與汽化室連接毛細管柱不能探進(jìn)太多，略超出卡套即可。
氫氣和空氣的比例對FID檢測器的影響 氫氣和空氣的比例應1:10，當氫氣比例過(guò)大時(shí)FID檢測器的靈敏度急劇下降，在使用色譜時(shí)別的條件不變的情況下，靈敏度下降要檢查一下氫氣和空氣流速。 氫氣和空氣有一種氣體不足點(diǎn)火時(shí)發(fā)出“砰”的一聲，隨后就滅火，一般當你點(diǎn)火電著(zhù)就滅，再點(diǎn)還著(zhù)隨后又滅是氫氣量不足。
3.更換色譜柱時(shí)要注意什么事項
色譜柱 的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會(huì )降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護色譜柱。 ① 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動(dòng)。
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì )影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì )沖動(dòng)柱內填料，因此在調節流速時(shí)應該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉動(dòng)不能過(guò)緩（如前所述）。 ② 應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/p>
③ 一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì )迅速降低柱效。
④ 選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。 有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
⑤ 避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進(jìn)行預處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護柱。 保護柱一般是填有相似固定相的短柱。
保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。 ⑥ 經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質(zhì)。
在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統中流動(dòng)相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規分析需要50~75ml。 下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。
甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。
如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇（乙腈）沖洗時(shí)重復注射100~200μl四氫呋喃數次有助于除去強疏水性雜質(zhì)。
四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類(lèi)脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數次。
此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0。1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。
陽(yáng)離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）、甲醇、水依次沖洗。 ⑦ 保存色譜柱時(shí)應將柱內充滿(mǎn)乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。
絕對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間。 ⑧ 色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時(shí)應更換濾片或將其取出進(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開(kāi)柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相（與柱內相同）填滿(mǎn)色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。
這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。 柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護、延長(cháng)柱壽命的作用。
采用保護柱會(huì )損失一定的柱效，這是值得的。 通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達2年以上。
以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內使用。 柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著(zhù)在柱頂的填料上。
新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補加填料使柱效恢復。 每次工作完后，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡。
當采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會(huì )腐蝕不銹鋼管道，不宜長(cháng)期與之接觸。
裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應每隔4~5天開(kāi)機沖洗15分鐘。
4.氣相色譜儀的使用步驟
1打開(kāi)穩壓電源； 2打開(kāi)氮氣閥，打開(kāi)凈化器上的載氣開(kāi)關(guān)閥，然后檢查是否漏氣，保證氣密性良好； 3調節總流量為適當值（根據刻度的流量表測得）； 4調節分流閥使分流流量為實(shí)驗所需的流量（用皂膜流量計在氣路系統面板上實(shí)際測量），柱流量即為總流量減去分流量； 5打開(kāi)空氣、氫氣開(kāi)關(guān)閥，調節空氣、氫氣流量為適當值； 6根據實(shí)驗需要設置柱溫、進(jìn)樣口溫度和FID檢測器溫度； 7打開(kāi)計算機與工作站； 8FID檢測器溫度達到150oC以上，按FIRE鍵點(diǎn)燃FID檢測器火焰； 9設置FID檢測器靈敏度和輸出信號衰減； 10待所設參數達到設置時(shí)，即可進(jìn)樣分析； 11實(shí)驗完畢后，先關(guān)閉氫氣與空氣，用氮氣將色譜柱吹凈后關(guān)機。
注意事項 （必須經(jīng)嚴格的培訓和考核合格后方可使用該儀器，未經(jīng)允許不得使用） 1氫氣發(fā)生器液位不得過(guò)高或過(guò)低； 2空氣源每次使用后必須進(jìn)行放水操作； 3進(jìn)樣操作要迅速，每次操作要保持一致； 4使用完畢后須在記錄本上記錄使用情況。
5.柱色譜中加混合樣品時(shí)應該注意哪些操作
柱色譜的使用注意事項很多，作為精密測試儀器，我們要盡可能多的考慮能夠引起各種誤差的操作。不僅僅是加注樣品時(shí)候哦。
1. 色譜柱使用前注意事項：
色譜柱的儲存液無(wú)特殊說(shuō)明，均為評價(jià)報告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱，輕則沒(méi)有數據，重則報廢。嚇人不嚇人你說(shuō)。
2. 流動(dòng)相：
在進(jìn)行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動(dòng)相使色譜柱充分平衡。流動(dòng)相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應當天配制以保持新鮮避免細菌產(chǎn)生，當然一般情況下都是隨用隨配的，沒(méi)人懶到一下配好幾天用的。
流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過(guò)濾，消除流動(dòng)相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應重新過(guò)濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應使用純水作為流動(dòng)相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5%的有機溶劑沖洗色譜柱，同時(shí)可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。
流動(dòng)相需脫氣后使用，可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時(shí)使用的流動(dòng)相與色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區別，應該使用過(guò)度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過(guò)大或流動(dòng)相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長(cháng)的平衡時(shí)間。
流動(dòng)相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統中的在線(xiàn)過(guò)濾器等裝置應該定期清洗或更換。
以常規硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0,BDSC18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。
流動(dòng)相PH值過(guò)大或過(guò)小使固定相結構破壞或溶解。一旦造成這種情況，很難恢復。
色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。避免壓力突然上升或變化幅度過(guò)大，否則會(huì )造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。操作溫度不要超過(guò)60℃哦，
3. 樣品：
樣品應當盡可能溶解在能與流動(dòng)相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。
樣品溶液在進(jìn)樣前應使用針頭式過(guò)濾器對樣品預先過(guò)濾。頻繁改變流動(dòng)相組成，會(huì )加速降低柱效。
樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預處理柱（SPE）對樣品進(jìn)行預處理；若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。
ps：題主認為以上啰嗦的太多么？要知道這么精密的儀器，用起來(lái)的啰嗦事更多，否則也對不起那么精準的數據不是？科學(xué)要嚴謹，操作多謹慎。
