防止菌種衰退的方法(防止菌種衰退的措施)

1.防止菌種衰退的措施有哪些

(1)講究配料用于制作原種、栽培種的培養(yǎng)料其原料要新鮮；難吸水的培養(yǎng)料應(yīng)先用足夠的水拌濕，充分拌勻后及時(shí)裝瓶（袋），上鍋滅菌，擱置時(shí)間不宜超過(guò)5小時(shí)。

（2）細(xì)心裝料根據(jù)培養(yǎng)料性質(zhì)、培養(yǎng)時(shí)間、滅菌方法等，選用合適的瓶或袋。培養(yǎng)料裝至離棉塞2~3厘米處，抹凈瓶（袋）口，然后加棉塞，以免水分和培養(yǎng)料把棉塞玷污。

制作母種注入培養(yǎng)基時(shí)要細(xì)心，切勿將培養(yǎng)基沾在試管口上。管口棉塞要松緊適中，過(guò)松易進(jìn)雜菌。

（3）滅菌徹底在滅菌時(shí)試管要輕放，瓶（袋）擺放要留空隙，棉塞不能互相擠壓。根據(jù)培養(yǎng)料和容器裝置，確定滅菌蒸汽壓力（或溫度）及滅菌時(shí)間。

注意排出冷空氣。放氣速度要慢。

（4）無(wú)菌操作料袋滅菌后冷卻至不燙手時(shí)再搬動(dòng)，可減少袋壁破裂。接種器具要保持潔凈，用前要消毒。

每個(gè)環(huán)節(jié)都要嚴(yán)格按無(wú)菌操作規(guī)程進(jìn)行。（5）精選良種選用無(wú)污染、菌絲生長(zhǎng)健壯的適齡母種和原種。

接種前認(rèn)真檢查，并且不要用表層菌種接種。接種最好破開瓶底，從下部接至離表面2~3厘米處；若從瓶口取種，應(yīng)把上層2~3厘米厚的菌種挖掉，然后接種。

（6）凈化環(huán)境培養(yǎng)室要通風(fēng)干燥，啟用前要清掃、消毒。培養(yǎng)菌種期間，每天要適當(dāng)通風(fēng)。

當(dāng)空氣相對(duì)濕度大于70%時(shí)，要開吸濕機(jī)、空調(diào)機(jī)或用生石灰、木炭等降低室內(nèi)濕度。（7）定期檢查接種后5~7天檢查1次是否有污染。

污染雜菌的要及時(shí)揀出處理，并且找出原因，加以防治。搬動(dòng)菌種瓶（袋）要小心輕放。

同時(shí)還要預(yù)防老鼠、蟑螂等為害和帶入雜菌。

2.菌種衰退的原因是什么

菌種退化是客觀規(guī)律，退化的菌種很難恢復(fù)原狀。

(1)退化原因

退化菌種的菌絲在培養(yǎng)基上表現(xiàn)生長(zhǎng)很慢，長(zhǎng)勢(shì)弱，稀疏，伸入培養(yǎng)基深層無(wú)力，分泌色素差；出耳慢，中途停止發(fā)育，子實(shí)體形態(tài)不一致，大小、厚薄不均，顏色改變，產(chǎn)量低。菌種退化原因主要有以下幾方面：

①基因變異。遺傳特性的表現(xiàn)是基因與環(huán)境因子共同作用的結(jié)果。當(dāng)基因往性狀差的方向發(fā)生變異時(shí)，即使環(huán)境條件適宜，也必然造成種性退化。

②無(wú)限繼代。制種技術(shù)和條件上的差別，只作組織分離、不作出耳鑒定，無(wú)限繼代、無(wú)限制地轉(zhuǎn)管，這些做法都加速了菌種的退化。

③營(yíng)養(yǎng)不良。長(zhǎng)期使用單一種類和配方、成分基本相同的培養(yǎng)基，造成營(yíng)養(yǎng)不能達(dá)到生理要求，菌絲生長(zhǎng)活力由強(qiáng)變?nèi)酰ダ贤嘶?/p>

④環(huán)境欠佳。菌絲生長(zhǎng)發(fā)育期環(huán)境不良，雜菌污染，也會(huì)加速菌種退化。

(2)防止措施

根據(jù)菌種衰老退化的原因，要針對(duì)性地采取以下措施：

①減少擴(kuò)接。菌種的退化、種性變異，是在繁殖過(guò)程中發(fā)生的，可采用控制菌種移接次數(shù)來(lái)防止。當(dāng)獲得優(yōu)良菌種后，嚴(yán)格控制轉(zhuǎn)管次數(shù)。生產(chǎn)中應(yīng)減少菌種擴(kuò)接次數(shù)。

②防止突變。采用0~4℃低溫保藏菌種，有條件時(shí)在液氮超低溫條件下保藏。

③分離復(fù)壯。優(yōu)質(zhì)菌種，需要經(jīng)常復(fù)壯。每次生產(chǎn)出耳后，應(yīng)挑選優(yōu)良子實(shí)體，進(jìn)行組織分離。每年進(jìn)行一次孢子分離，經(jīng)出耳鑒定后，選擇性狀優(yōu)良的再進(jìn)行組織分離。總之，有性孢子分離與無(wú)性組織分離要交替使用。用有性繁殖來(lái)發(fā)現(xiàn)好的變異菌株，用組織分離來(lái)鞏固這些優(yōu)良菌株的遺傳特性。復(fù)壯的措施很多，諸如更換培養(yǎng)基、創(chuàng)造適宜環(huán)境、防止雜菌污染及避免多品種混合栽培等。

3.防止菌種退化的措施是什么

防止菌種退化的措施（1）防止菌種的混雜在菌種轉(zhuǎn)管，出菇試驗(yàn)等工作中，均應(yīng) 加強(qiáng)品種隔離，減少品種間的混雜，以保證優(yōu)良品種的遺傳組成在 較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)能保持相對(duì)的穩(wěn)定。

（2）控制菌種傳代次數(shù)菌種傳代次數(shù)越多，產(chǎn)生變異的概率 就越高，因此菌種發(fā)生退化的概率就會(huì)越多，生產(chǎn)中應(yīng)嚴(yán)格控制菌 種的移接代數(shù)。 （3）采用有效的菌種保藏方法保存菌種菌種保存應(yīng)是短期、中期和長(zhǎng)期三者相結(jié)合，根據(jù)不同的要求從不同保藏方法中進(jìn)行 轉(zhuǎn)接，確保菌種能長(zhǎng)期保持該品種的原有優(yōu)良性狀。

（4）創(chuàng)造菌種生長(zhǎng)良好營(yíng)養(yǎng)條件和外界環(huán)境菌種培養(yǎng)基的 營(yíng)養(yǎng)條件應(yīng)適宜，才能使菌種生長(zhǎng)健壯，減少退化的發(fā)生。 營(yíng)養(yǎng)不 足和過(guò)于豐富對(duì)菌種生長(zhǎng)均不利。

菌種的生長(zhǎng)繁殖受到物理、化 學(xué)、生物等外界條件的影響，如條件適宜，菌種生長(zhǎng)正常，不易退 化，不相適宜，則會(huì)引起菌種的退化。（5）防止病毒感染對(duì)菌種可能遭受病毒的感染應(yīng)保持警惕。

及時(shí)檢驗(yàn)有疑問(wèn)的菌種。淘汰感染病毒菌株，尤其是淘汰病毒粒 子含量大，菌絲體及子實(shí)體性狀已受到嚴(yán)重影響的菌株。

4.如何防止菌種退化

遺傳是相對(duì)的，變異是絕對(duì)的。

因此，要求一個(gè)菌種永遠(yuǎn)不衰退 是不可能的，而積極采取措施，使菌種優(yōu)良特性的退化延緩是可以做到的。采用減少傳代、經(jīng)常純化、創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件、用單細(xì)胞移 種傳代以及科學(xué)保藏等措施，不但可以使菌種保持優(yōu)良的生產(chǎn)能力， 而且還能使已退化的菌種得到恢復(fù)提高。

釀造調(diào)味品工業(yè)生產(chǎn)中使用的優(yōu)良菌種來(lái)之不易，應(yīng)該盡可能地把菌種的退化控制在最低限度， 具體措施如下：1。 盡量減少傳代盡量避免不必要的移種和傳代，并將必要的傳代控制在最低限 度，以減少自發(fā)突變的概率。

微生物都存在自發(fā)突變，而且這種現(xiàn)象都是在繁殖過(guò)程中發(fā)生或表現(xiàn)出來(lái)的。 菌種的傳代次數(shù)越多，繁殖越 頻繁，產(chǎn)生突變的概率就越高，因而發(fā)生衰退的機(jī)會(huì)就越多。

所以， 不論在實(shí)驗(yàn)室還是在生產(chǎn)實(shí)踐中，必須嚴(yán)格控制菌種的傳代次數(shù)。通常，在發(fā)酵工廠生產(chǎn)菌種的傳代中，首先要選擇好性能優(yōu)良的沙土管 斜面原種，并保藏一定數(shù)量的沙土管原種。

每支斜面原種擴(kuò)培成多支第二代斜面，每批生產(chǎn)用一支第二代斜面，即采用第三代的擴(kuò)培物用于發(fā)酵生產(chǎn)。新鮮的二代斜面用完以后，再?gòu)牡诙惩凉苄泵嬖N 活化擴(kuò)培為多支第二代斜面用于生產(chǎn)中，直到所有新的第二代斜面用 完以后，再?gòu)纳惩凉茉N出發(fā)擴(kuò)培，如此往復(fù)，既限制了傳代次數(shù)，防止自發(fā)突變和低產(chǎn)菌株的進(jìn)一步擴(kuò)大，又保證了生產(chǎn)的持續(xù)穩(wěn)定的 進(jìn)行，是實(shí)際生產(chǎn)中防止菌種退化的有效措施。

而采用良好的菌種保 藏方法，也能大大減少不必要的移種和傳代。2。

經(jīng)常純化菌種菌種的純化工作，一般是采取常規(guī)的分離純化方法來(lái)進(jìn)行的。具 體的菌種純化方法與本章中純種分離方法相同。

對(duì)于不產(chǎn)孢子的絲狀菌的分離純化，與前述的兩類方法不同，即將菌種的菌絲打成斷片或 碎片，分離于瓊脂平板上，形成單個(gè)菌落，然后用滅菌小刀切取菌落 周緣的頂端菌絲，進(jìn)行分離培養(yǎng)；或用毛細(xì)管插人菌絲頂端以截取單細(xì)胞用于分離培養(yǎng)。 3。

創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件創(chuàng)造一個(gè)適合菌種的生長(zhǎng)條件，就可以在一定程度上防止菌種退 化。例如，在赤霉素生產(chǎn)菌（Ge66erreZZa/M）i々Mrro0的培養(yǎng)基中，加入糖蜜、天冬酰胺、谷氨酰胺、5'-核苷酸或甘露醇等豐富營(yíng)養(yǎng)物 時(shí)，具有防止菌種退化的效果；在棲土曲霉3。

942的培養(yǎng)過(guò)程中，改變培養(yǎng)溫度，即由28?30°C提高到30?34°C可防止其產(chǎn)孢子能力的衰退。為了防止菌種退化，一定要選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。

對(duì)一 個(gè)優(yōu)良的菌種來(lái)說(shuō)，究竟什么樣的培養(yǎng)基能保持菌種的優(yōu)良特性，應(yīng)進(jìn)行專門的探討研究。國(guó)外一些專業(yè)保藏菌種的公司，對(duì)于一些有價(jià) 值的菌種都要設(shè)計(jì)20多種培養(yǎng)基，分別接種瓊脂平板，在一定溫度 下培養(yǎng)到菌落成熟，根據(jù)形態(tài)變化來(lái)確定哪種培養(yǎng)基引起的變異最大。

而對(duì)變異小或無(wú)變異的對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基進(jìn)一步進(jìn)行菌種移種傳代試驗(yàn)，測(cè)定傳代過(guò)程中菌種產(chǎn)量的穩(wěn)定性。然后，以此來(lái)確定作為菌種 保藏的合適的培養(yǎng)基。

4。 用單核細(xì)胞傳代霉菌、放線菌的菌絲是多核的，其中也存在著異核體或部分結(jié)合 體。

因此，用菌絲接種、傳代易產(chǎn)生不純細(xì)胞，經(jīng)幾代移種，必定會(huì)出現(xiàn)退化現(xiàn)象，故常用單核的孢子移種傳代。 為了避免移種孢子時(shí)帶 人菌絲，可以采用滅菌的小棉花團(tuán)裹在接種針前端輕輕蘸取菌落表面 的孢子進(jìn)行傳代，其效果較好。

5。 采用有效的菌種保藏方法在用于工業(yè)生產(chǎn)的菌種中，重要的性狀都屬于數(shù)量性狀，而這類 性狀恰好是最易退化的。

即使在較好的保藏條件下，仍然存在這種現(xiàn)象。 溫度對(duì)微生物細(xì)胞的突變影響很大。

在高溫條件下要比在低溫條 件下發(fā)生突變的機(jī)會(huì)大得多。一般情況下，需在0?4°c的條件下保存 菌種，如果條件允許，可以在一196?一20°C的超低溫度下保存菌種。

對(duì)菌種保藏來(lái)講，良好的保藏條件也是極其重要的。首先，作為 菌種保藏的培養(yǎng)基，一般應(yīng)該和生產(chǎn)菌種的培養(yǎng)基成分基本相同。

而用于斜面保藏菌種的培養(yǎng)基，其組成則有所不同，一般含有較多的有 機(jī)氮，少含或不含糖分，總量不超過(guò)2%，以防止pH值的變化。對(duì) 產(chǎn)腺苷的黃嘌呤缺陷型菌株，在培養(yǎng)基中加人黃嘌呤、鳥嘌呤、組氨酸和蘇氨酸等，可使其回復(fù)突變率下降，生長(zhǎng)繁殖速度減緩，從而延 緩?fù)嘶F(xiàn)象的出現(xiàn)。

總之，保藏菌種的培養(yǎng)基的成分，既要有益于菌 種生長(zhǎng)繁殖，又要有益于菌種保藏期間保持其優(yōu)良性狀。

5.怎樣防止菌種退化

菌種突然或逐漸喪失原有的生活力和豐產(chǎn)性能的現(xiàn)象， 稱為菌種退化。

（1）菌種退化的原因菌種退化的內(nèi)因即遺傳性能發(fā)生 了變化。食用菌在自然界互相雜交能引起遺傳性狀的分離變 化；菌種生產(chǎn)過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)的缺乏，溫度的變化以及雜菌的污染 等，特別是病毒感染。

此外，外界條件使某一菌株不能獲得適 宜的生長(zhǎng)條件，從而使其失去優(yōu)良菌株性狀；某一菌株繼代 （轉(zhuǎn)接）次數(shù)過(guò)多，使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，個(gè)體的衰老，引起生活功能 的下降，逐漸失去其生產(chǎn)價(jià)值。（2） 防止菌種退化的措施根據(jù)退化的原因，采取相應(yīng)的 措施，使生活力和生產(chǎn)性狀退化的菌種，提高或恢復(fù)到原有的優(yōu)良性狀，這種做法稱為菌種復(fù)壯。

菌種復(fù)壯常用的方法如 下：避免轉(zhuǎn)管移植的次數(shù)過(guò)多。生產(chǎn)分離提純的母種時(shí)，第一 次接種的試管數(shù)量要多，以后每次轉(zhuǎn)接母種時(shí)，只取用一部分原始種試管，多數(shù)原始種試管仍保存在冰箱里，留作分次使 用。

這樣可以避免雜菌的污染，同時(shí)也可以減低菌種退化的 速度；改變培養(yǎng)基的配方。 培養(yǎng)某一菌種所用營(yíng)養(yǎng)成分的配方，每隔一段時(shí)間需要變換營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基的成分，能使衰 弱的菌絲恢復(fù)健壯；定期組織分離。

每年在第一潮子實(shí)體出 現(xiàn)時(shí)，采集有代表性的子實(shí)體進(jìn)行組織分離，經(jīng)提純的母種用于生產(chǎn)。在有條件的單位，也可通過(guò)遺傳育種的方法獲得母 種的復(fù)壯。