當人類基因體定序計劃的重要里程碑完成之后,生命科學正式邁入了一個后基因體時代,基因芯片 (microarray) 的出現讓研究人員得以宏觀的視野來探討分子機轉。不過分析是相當復雜的學問,正因為基因芯片成千上萬的信息使得分析數據量龐大,更需要應用到生物統(tǒng)計與生物信息相關軟件的協(xié)助。要取得一完整的數據結果,除了前端的實驗設計與操作的無暇外,如何以精確的分析取得可信數據,運籌帷幄于方寸之間,更是畫龍點睛的關鍵。
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基因芯片的應用
基因芯片可以同時針對生物體內數以千計的基因進行表現量分析,對于科學研究者而言,不論是細胞的生命周期、生化調控路徑、蛋白質交互作用關系等等研究,或是藥物研發(fā)中對于藥物作用目標基因的篩選,到臨床的疾病診斷預測,都為基因芯片可以發(fā)揮功用的范疇。
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基因表現圖譜抓取了時間點當下所有的動態(tài)基因表現情形,將所有的探針所代表的基因與熒光強度轉換成基本數據 (raw data) 后,仿如尚未解密前的達文西密碼,隱藏的奧秘由絲絲的線索串聯(lián)綿延,有待專家抽絲剝繭,如剝洋蔥般從外而內層層解析出數千數萬數據下的隱晦含義。
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要獲得有意義的分析結果,恐怕不能如潑墨畫般灑脫隨興所致。從 raw data 取得后,需要一連貫的分析流程 (圖一),經過許多統(tǒng)計方法,才能條清理明的將 raw data 整理出一初步的分析數據,當處理到取得實驗組除以對照組的對數值后 (log2 ratio),大約完成初步的統(tǒng)計工作,可進展到下一步的進階分析階段。
基因芯片(Gene chip)技術是指通過微陣列(Microarray)技術將高密度DNA片段陣列通過高速機器人或原位合成方式以一定的順序或排列方式使其附著在如玻璃片等固相表面,以熒光標記的DNA探針,借助堿基互補雜交原理,進行大量的基因表達及監(jiān)測等方面研究的技術。 基因芯片具有快速、高通量、自動化、使用的試劑少等優(yōu)點,本文主要介紹基因芯片數據分析和信息挖掘方法,包括聚類分析和基因調控網絡分析。
詳細資料請參考:on
基因芯片的原位合成法是基于組合化學的合成原理[9], 通過一組定位模板來決定基片表面上不同化學單體的偶聯(lián)位點和次序, 把腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)四種不同堿基的核苷酸按不同次序化學偶聯(lián)在相應的位點, 原位合成序列不同的寡核苷酸探針, 形成DNA芯片. 這一技術是由Affymetrix公司的Fodor及其同事最先發(fā)明的[1], 他們使用含光敏化學保護基的DNA合成試劑, 用光脫保護法直接在基片上合成寡核苷酸探針, 即光導向原位合成法. 該方法的優(yōu)點在于精確性高, 缺點是制造光掩蔽劑既費時又昂貴.。
將基因表達譜芯片的數據按照指定的格式和要求上傳到NCBI 的GEO Datesets 上面的方法
你到GEO上注冊,然后按照他們的步驟做,他們會有人聯(lián)系你來確保數據質量的 。格式等直接問他們就可以。通常是SOFT格式。
GEO Database
近年來,利用高通量方法檢測基因表達越來越普及,諸如微陣列雜交和基因表系列分析(SAGE)可以同時測量數以萬計的基因轉錄腳本(gene transcript)。基因表達大棚車(GEO:Gene Expression Omnibus)則是歸檔和自由分發(fā)科研人員提交的高通量基因表達數據的公共倉庫。目前,GEO存儲了大約10億單個基因表達的數據,來自于100多種生物,內容廣泛涉及到各種生物學問題。這些大容量的數據可以使用用戶友好的以Web為基礎的工具進行有效的挖掘,檢索和可視化表達。
當人類基因體定序計劃的重要里程碑完成之后,生命科學正式邁入了一個后基因體時代,基因芯片 (microarray) 的出現讓研究人員得以宏觀的視野來探討分子機轉。
不過分析是相當復雜的學問,正因為基因芯片成千上萬的信息使得分析數據量龐大,更需要應用到生物統(tǒng)計與生物信息相關軟件的協(xié)助。要取得一完整的數據結果,除了前端的實驗設計與操作的無暇外,如何以精確的分析取得可信數據,運籌帷幄于方寸之間,更是畫龍點睛的關鍵。
?0?2基因芯片的應用基因芯片可以同時針對生物體內數以千計的基因進行表現量分析,對于科學研究者而言,不論是細胞的生命周期、生化調控路徑、蛋白質交互作用關系等等研究,或是藥物研發(fā)中對于藥物作用目標基因的篩選,到臨床的疾病診斷預測,都為基因芯片可以發(fā)揮功用的范疇。?0?2基因表現圖譜抓取了時間點當下所有的動態(tài)基因表現情形,將所有的探針所代表的基因與熒光強度轉換成基本數據 (raw data) 后,仿如尚未解密前的達文西密碼,隱藏的奧秘由絲絲的線索串聯(lián)綿延,有待專家抽絲剝繭,如剝洋蔥般從外而內層層解析出數千數萬數據下的隱晦含義。
?0?2要獲得有意義的分析結果,恐怕不能如潑墨畫般灑脫隨興所致。從 raw data 取得后,需要一連貫的分析流程 (圖一),經過許多統(tǒng)計方法,才能條清理明的將 raw data 整理出一初步的分析數據,當處理到取得實驗組除以對照組的對數值后 (log2 ratio),大約完成初步的統(tǒng)計工作,可進展到下一步的進階分析階段。
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