菌種鑒定方法(菌種鑒定的方法)

1.菌種鑒定的方法

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內容來(lái)自用戶(hù)：于秀蘭

菌種鑒定

篇一：菌種鑒定

中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心

CICC是我國唯一的國家級工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，有近三十年菌種分類(lèi)鑒定的歷史，擁有先進(jìn)的生物科學(xué)儀器和從事分類(lèi)鑒定的專(zhuān)業(yè)化人員隊伍。CICC承擔全國工業(yè)微生物菌種的委托鑒定工作，所提供的菌種鑒定與評價(jià)技術(shù)服務(wù)獲得“國家工商總局（SCIC）經(jīng)營(yíng)許可”，為國內科研機構、大專(zhuān)院校和生產(chǎn)企業(yè)等提供微生物菌種鑒定服務(wù)，涉及細菌、酵母、放線(xiàn)菌和絲狀真菌等多類(lèi)微生物。菌種鑒定手段包括形態(tài)學(xué)觀(guān)察、生理生化特性鑒定、BIOLOG碳源自動(dòng)分析鑒定、分子生物學(xué)鑒定、API細菌數值鑒定、功能性分析及功能基因、RAPD、SSCP、TLC薄層層析、全細胞脂肪酸分析鑒定、（G+C）mol%測定、DNA/DNA同源性測定等。

鑒定項目

序號服務(wù)項目菌種類(lèi)別

1純菌種鑒定（包含形態(tài)、理化、分子）細菌、酵母、放線(xiàn)菌、絲狀真菌2功能基因鑒定（pheS、gryA、atpD等）乳桿菌、芽胞桿菌、雙歧桿菌3產(chǎn)品微生物解析――

4產(chǎn)品污染菌種鑒定――

5菌群分析及純種分離――

6細胞壁化學(xué)組分分析（氨基酸）細菌、放線(xiàn)菌

7細胞壁化學(xué)組分分析（糖）細菌、放線(xiàn)菌

8 DNA(G+C)mol%含量細菌、放線(xiàn)菌

9 DNA/DNA雜交細菌、酵母、放線(xiàn)菌、絲狀真菌10脂肪酸分析細菌、放線(xiàn)菌CICCCICC

2.菌種鑒定常用的分離方法有哪些

菌種質(zhì)量檢測的目標包括菌絲形態(tài)、菌落特征以及子實(shí)體形態(tài)等方面。

質(zhì)量檢測常用方法如下： （1）建立標準的培養和觀(guān)察方法 對于一個(gè)栽培品種各菌種的質(zhì)量檢測，實(shí)際上是以該品種典型的生物學(xué)特性（包括形態(tài)特征、生理生態(tài)特性、栽培習性）為參照標準進(jìn)行比較，以檢驗菌種是否存在品種退化、菌種老化、病菌侵染、雜菌污染和品種混雜等質(zhì)量問(wèn)題。同時(shí)，菌種質(zhì)量檢測不僅要考慮從哪些方面來(lái)評價(jià)一個(gè)菌種的質(zhì)量?jì)?yōu)劣，也要考慮用怎樣的標準方法對菌種質(zhì)量進(jìn)行評價(jià)的問(wèn)題。

因為一定的結果來(lái)源于一定的方法和一定的條件。方法和條件不同，結果就失去了可比性，也就無(wú)法鑒別，因此，需要建立標準。

這些標準包括：培養基、培養條件（溫度、濕度、pH、光照等）、菌種的菌齡等。 （2）連續觀(guān)察 在菌種生長(cháng)過(guò)程中，要連續觀(guān)察，一切不正常的現象只有在生長(cháng)過(guò)程中才能表現出來(lái)。

而當菌種長(cháng)滿(mǎn)培養基表面后，其不正常現象往往會(huì )被菌種的過(guò)齡而掩蓋。 （3）宏觀(guān)檢查 對食用菌母種、原種及栽培種的宏觀(guān)檢查要根據其培養特征來(lái)進(jìn)行（參見(jiàn)前述有關(guān)內容），這是菌種生產(chǎn)者及使用者普遍使用的方法，簡(jiǎn)單易行，但需要有多年的從業(yè)經(jīng)驗與技術(shù)沉淀。

如被檢菌種表現出菌落生長(cháng)速度不一致、氣生菌絲變稀疏或出現扇變菌落、菌落上過(guò)早出現色素、或不同特征的菌落混雜共存、或菌落上出現黑褐色、青灰色、黃褐色或紅色的孢子堆，均可以確定該菌種存在質(zhì)量問(wèn)題。優(yōu)質(zhì)菌種外觀(guān)菌絲潔白、密集粗壯，生長(cháng)速度一致，齊發(fā)并進(jìn)。

在生產(chǎn)實(shí)踐中，廣大菇農和專(zhuān)業(yè)工作人員總結出“純、正、壯、潤、香”的質(zhì)量檢查方法。這種應用感官識別菌種優(yōu)劣，是經(jīng)驗的總結，能大致、快速地鑒定出菌種的優(yōu)劣。

具體方法是： “純”指菌種的純度高，無(wú)雜菌感染，無(wú)斑塊、無(wú)抑制線(xiàn)，無(wú)“退菌”、“斷菌”現象等。 “正”指菌絲無(wú)異常，具有親本正宗的特征，如菌絲純白、有光澤，生長(cháng)整齊，連結成塊，具彈性等。

“壯”指菌絲發(fā)育粗壯，長(cháng)勢旺盛，分枝多而密，在培養基上恢復、定植、蔓延速度快。 “潤”指菌種含水量適中，基質(zhì)濕潤，與瓶壁緊貼，瓶頸略有水珠，無(wú)干縮、松散現象。

“香”指具該品種特有的香味，無(wú)霉變、腥臭、酸敗氣味。 通過(guò)檢測各種食用菌菌絲生長(cháng)的色澤、速度、均勻度等特征是否正常，來(lái)判斷菌種生長(cháng)是否正常、是否可用，但辨別不了是否優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。

（4）顯微鏡檢查 對菌絲體進(jìn)行顯微觀(guān)察，可以確定菌絲粗細、分枝、隔膜、鎖狀聯(lián)合等特性是否均一，是否與該栽培品種的典型特征一致（參見(jiàn)前述相關(guān)內容）。具有不同形態(tài)特征的菌絲體存在于同一菌種體中，表明該菌種存在質(zhì)量問(wèn)題；如果出現菌絲體重寄生現象，常表現出不同特征的菌絲體相互纏繞，或菌絲體中空變細，或在寄生點(diǎn)出現吸器等不正常現象。

鏡檢的方法是：挑取少量菌絲，置載玻片中央的水滴上，用解剖針或接種針撥散，蓋上蓋玻片，也可加碘酒或美藍等染色后進(jìn)行鏡檢。正常的菌絲一般透明、分枝狀，有橫隔和明顯的鎖狀聯(lián)合；異宗結合的食用菌，如僅有單核菌絲，不具結實(shí)性，不宜作菌種用；雙核菌絲中，鎖狀聯(lián)合多而密，則結菇力強，一般可認為是好菌種。

如： ①雙孢菇 觀(guān)察雙孢菇單孢子萌發(fā)后的菌絲生長(cháng)形態(tài)。凡菌絲潔白、健壯，保存時(shí)間較長(cháng)時(shí)菌絲顏色不變，較耐28℃以上氣溫，生長(cháng)在基質(zhì)上平貼培養基表面，氣生菌絲不多的，為同化能力較強，產(chǎn)量較高的菌株。

相反，菌絲生長(cháng)初期好，很快變黃變稀，如蜘蛛絲一樣，長(cháng)出培養基表面菌絲較多的菌株產(chǎn)量較低。 ②香菇 觀(guān)察香菇的雙核菌絲，在斜面培養基上生長(cháng)速度達到1.2厘米/天以上的，菌絲不十分粗壯和潔白，鎖狀連合頻繁，鎖狀連合在菌絲間相距較近，且在觀(guān)察面上分布均勻，一般均是高產(chǎn)和抗雜能力較強的菌株。

香菇出菇的密度與鎖狀連合有一定關(guān)系。 ③草菇 觀(guān)察草菇菌絲，發(fā)現菌絲分枝角度大的，出菇率高，產(chǎn)量高。

菌絲分枝角度小、平行排列的，產(chǎn)量低。 各種食用菌的菌絲生長(cháng)是否正常、是否可用，一般都以色澤、速度、均勻度等特征加以檢測，但這并不能說(shuō)明其是否優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。

（5）拮抗試驗 也稱(chēng)對峙反應。同一種食用菌，經(jīng)分離或雜交，將選育出許多不同的菌株，這些菌株的菌絲在形態(tài)上很難區別。

如不同編號的香菇菌種，都是白色絨毛狀菌絲，鏡檢時(shí)均具有鎖狀聯(lián)合等。在當前菌種管理工作尚不十分健全的情況下，“同名異種”、“同種異名”的現象普遍發(fā)生，要識別異同，可采用“拮抗試驗”加以區別。

具體方法是： 用1支20毫米*200毫米的無(wú)底試管，中央部位裝入長(cháng) 5~7厘米的木屑麩糠培養基，兩端壓平并蓋棉塞，滅菌后，兩端各接入兩株受檢的菌種 1小塊，25℃左右條件下培養，當兩端菌絲往中央生長(cháng)并相互接觸后，把試管移至20℃、約300勒克斯的漫射光下繼續培養，觀(guān)察菌絲接觸區有無(wú)對峙反應。若無(wú)褐色的帶線(xiàn)出現，表示兩個(gè)受檢菌株的基因極相似或相同，是相同的菌株，僅編號不同，即同種異名。

如果受檢菌株間形成帶線(xiàn)，則表示是不同的菌株。 用平板進(jìn)行拮抗試驗測試，方法是在無(wú)菌的PDA培養基平板上各接入2個(gè)或多個(gè)被檢菌株的菌種，在上述條件下培養，觀(guān)察菌。

3.請問(wèn)一下菌種鑒定的方法和實(shí)驗步驟

實(shí)驗步驟：菌種鑒定工作是各類(lèi)微生物學(xué)實(shí)驗室都經(jīng)常遇到的基礎性工作。

不論鑒定對象屬哪一類(lèi)，其工作步驟都離不開(kāi)以下三步：①獲得該微生物的純種培養物；②測定一系例必要的鑒定指標；③查找權威性的鑒定手冊。 一、經(jīng)典分類(lèi)鑒定方法 群體：菌落形態(tài)，在半固體或液體培養基中的生長(cháng)狀態(tài)等* 形態(tài) 個(gè)體：細胞形態(tài)，染色反應，各種特殊構造等* 營(yíng)養要求：能源，碳源，氮源，生長(cháng)因子等* 生理、生化反應 酶；產(chǎn)酶種類(lèi)和反應物性等* 代謝產(chǎn)物：種類(lèi)，產(chǎn)量，顯色反應等* 經(jīng)典指標 生態(tài)特性：生長(cháng)溫度，對氧的需要，宿主種類(lèi)等* 生活史特點(diǎn)* 血清學(xué)反應* 噬菌體的敏感性* 其它 經(jīng)典分類(lèi)法 經(jīng)典分類(lèi)法是一百多年來(lái)進(jìn)行微生物分類(lèi)的傳統方法。

其特點(diǎn)是人為地選擇幾種形態(tài)生理生化特征進(jìn)行分類(lèi)，并在分類(lèi)中將表型特征分為主、次。一般在科以上分類(lèi)單位以形態(tài)特征、科以下分類(lèi)單位以形態(tài)結合生理生化特征加以區分。

* A. 能在 60 o C 以上生長(cháng) * B. 細胞大，寬度 1.3~1.8mm ………………… 1. 熱微菌屬 （ Thermomicrobium ） * B. 細胞小，寬度 0.4~0.8mm * C. 能以葡萄糖為碳源生長(cháng) * D. 能在 pH4.5 生長(cháng) …………………………… 2. 熱酸菌屬 （ Acidothermus ） * DD. 不能在 pH4.5 生長(cháng) …………………………………… 3. 棲熱菌屬 （ Thermus ） * CC. 不能以葡萄糖為唯一碳源 ……………… 4. 棲熱嗜油菌屬 （ 棲熱嗜獅菌屬 Thermoleophilum ） * AA. 不能在 60 o C 以上生長(cháng) 二、現代分類(lèi)鑒定方法 * 近年來(lái)，隨著(zhù)分子生物學(xué)的發(fā)展和各項新技術(shù)的廣泛應用，促使微生物分類(lèi)鑒定工作有了飛速發(fā)展。對微生物鑒定工作來(lái)說(shuō)，已從經(jīng)典的表型特征的鑒定深入到現代的遺傳學(xué)特性的鑒定、細胞化學(xué)組分的精確分析以及利用電子計算機進(jìn)行數值分類(lèi)研究等新的層次上。

* （一）微生物遺傳型的鑒定* DNA是除少數RNA病毒以外的一切微生物的遺傳信息載體。每一種微生物均有其自己特有的、穩定的DNA成分和結構，不同微生物間DNA成分和結構的差異程度代表著(zhù)它們間新緣關(guān)系的遠近。

因此，測定每種微生物DNA的若干重要數據，是微生物鑒定中極其重要的指標：1. DNA的堿基組成（G+Cmol%）* 每一個(gè)微生物種的 DNA 中 GC mol% 的數值是恒定的，不會(huì )隨著(zhù)環(huán)境條件、培養條件等的變化而變化，而且在同一個(gè)屬不同種之間， DNA 中 GCmol% 的數值不會(huì )差異太大，可以某個(gè)數值為中心成簇分布，顯示同屬微生物種的 GC mol% 范圍。 DNA 中 GC mol% 分析主要用于區分細菌的屬和種，因為細菌 DNA 中 GC 含量的變化范圍一般在 25 %~ 75 %；而放線(xiàn)菌 DNA 中的 GC 比例范圍非常窄 （37 %~ 51%） 。

一般認為任何兩種微生物在 GC 含量上的差別超過(guò)了 10 %，這兩種微生物就肯定不是同一個(gè)種。因此可利用 G+C mol %來(lái)鑒別各種微生物種屬間的親緣關(guān)系及其遠近程度。

值得注意的是，親緣關(guān)系相近的菌，其 G+C mol %含量相同或者近似，但 G+C mol %相同或近似的細菌，其親緣關(guān)系并不一定相似，這是因為這一數據還不能反映出堿基對的排列序列，而且如放線(xiàn)菌的 DNA 的 GC mol% 在 37 ~ 51 之間，企圖在這么小的范圍內區分放線(xiàn)菌的幾十個(gè)屬顯然是不現實(shí)的。要比較兩種細菌的 DNA 堿基對排列序列是否相同，以及相同的程度如何，就需做核酸雜交試驗。

1. DNA的堿基組成（G+Cmol%）* 1）每個(gè)生物種都有特定的GC%范圍，因此后者可以作為分類(lèi)鑒定的指標。細菌的GC%范圍為25--75%，變化范圍最大，因此更適合于細菌的分類(lèi)鑒定。

* 2)GC%測定主要用于對表型特征難區分的細菌作出鑒定，并可檢驗表型特征分類(lèi)的合理性，從分子水平上判斷物種的親緣關(guān)系。* 3）使用原則：* G+C含量的比較主要用于分類(lèi)鑒定中的否定每一種生物都有一定的堿基組成，親緣關(guān)系近的生物，它們應該具有相似的G+C含量，若不同生物之間G+C含量差別大表明它們關(guān)系遠。

但具有相似G+C含量的生物并不一定表明它們之間具有近的親緣關(guān)系。1. DNA的堿基組成（G+Cmol%）* 同一個(gè)種內的不同菌株G+C含量差別應在4~5%以下；同屬不同種的差別應低于10~15%。

所以G+C含量已經(jīng)作為建立新的微生物分類(lèi)單元的一項基本特征，它對于種、屬甚至科的分類(lèi)鑒定有重要意義。* 若二個(gè)在形態(tài)及生理生化特性方面及其相似的菌株，如果其G+C含量的差別大于5%，則肯定不是同一個(gè)種，大于15%則肯定不是同一個(gè)屬。

* 在疑難菌株鑒定、新種命名、建立一個(gè)新的分類(lèi)單位時(shí)，G+C含量是一項重要的，必不可少的鑒定指標。其分類(lèi)學(xué)意義主要是作為建立新分類(lèi)單元的一項基本特征和把那些G+C含量差別大的種類(lèi)排除出某一分類(lèi)單元。

2.核酸的堿基組成和分子雜交：* 與形態(tài)及生理生化特性的比較不同，對DNA的堿基組成的比較和進(jìn)行核酸分子雜交是直接比較不同微生物之間基因組的差異，因此結果更加可信。DNA-DNA 雜交 * DNA 雜交法的基本原理是用 DNA 解鏈的可逆性和堿基配對的專(zhuān)一性，將不同來(lái)源的 DNA 在體外加熱解鏈，并在合適的條件下，使互補的堿基重新配對結合成雙鏈 DNA ，然后根據能生成雙鏈的情況，檢測雜合百分數。

如果兩條單鏈 DNA 的堿基順序全部相。

4.食用菌菌種質(zhì)量鑒定的內容和方法有哪些

1、外觀(guān)直接觀(guān)察鑒定

外觀(guān)菌種，菌絲濃白、粗壯、富有彈性，則生命力強；如果菌種菌絲萎縮，干燥無(wú)色澤，或菌絲體自溶產(chǎn)生了多量紅褐色液體，則生活力已變弱，不宜再用；木塊菌種如仍保持硬實(shí)，則屬于生活力強的菌種，如若木塊變得軟化松散，則已老化，不宜使用。

2、培養觀(guān)察鑒定

對于分離、選育和引進(jìn)的菌種，通過(guò)培養，觀(guān)察菌絲體對干、濕度和溫度等方面的適應特性。如將菌絲體置于偏干、偏濕和干濕相宜的條件下培養，若菌絲在前兩種條件下能良好生長(cháng)，而在干濕相宜的條件下生長(cháng)最佳，則說(shuō)明是好菌種。

3、液體培養鑒定

配制2%糖水溶液，經(jīng)常規滅菌消毒，挑取黃豆（4165, 7.00, 0.17%）粒大的菌塊，放入100毫升上述溶液中，置于25——28℃溫度下培養3——7天后，若液面出現氣泡，產(chǎn)生“油皮”，發(fā)生渾濁現象，說(shuō)明菌種本身有雜菌；如果苗塊下沉，或遲遲才長(cháng)出很薄的菌絲層，則說(shuō)明菌種生活力弱；如若液面四周的菌絲生長(cháng)快，且濃白呈棉絮狀，則表明菌種生命力強。

4、鋸木屑瓶栽鑒定和周期產(chǎn)量鑒定

瓶栽鑒定的做法與培育栽培的方法相似，把鋸木屑培養料裝得松一些，適當加大濕度，把需要鑒定的菌種接種于培養基中，做好記錄，在26℃恒溫下培養15天。然后使溫度降至15——20℃，并給予較好的散射光條件，再培育半個(gè)月左右，在瓶壁和料面上就會(huì )出現子實(shí)體原基和少量子實(shí)體。若未發(fā)現雜菌和異常現象，再把菌種接在木段上，做周期產(chǎn)量鑒定。如果子實(shí)體生長(cháng)旺盛，高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)，具備優(yōu)良品種特性，并且沒(méi)有雜菌混生，說(shuō)明菌種可靠，可以保存并投入大面積生產(chǎn)。實(shí)踐證明，以上菌種質(zhì)量的鑒定方法是比較科學(xué)的，可以篩選出優(yōu)良菌種，為廣大用戶(hù)服務(wù)。

5.微生物上,鑒別細菌菌種的方法有

首先如果你的菌株是自然界中分離得到，就只能鑒定到種，不能鑒定到株，因為多多少少和其他株系的細菌有區別，即便你做了一些特征的鑒定，發(fā)現和某一株細菌一模一樣，你也沒(méi)有理由說(shuō)你的細菌就是那一株細菌，因為你不可能把所有的特征都做完，株和株之間的關(guān)系就相當于不同的人之間的關(guān)系，世界上不可能有完全相同的兩個(gè)人。除非你知道你的細菌本來(lái)就是某一株細菌擴增出來(lái)的（而且要保證沒(méi)有變異，否則就是一個(gè)新株），可是這樣就沒(méi)必要鑒定了。

菌種鑒定一般就只要提取基因組DNA，然后PCR擴增16srDNA片段，上GeneBank或者Eztaxon對比即可。一般序列相似度在97%以上就可以認為是同種細菌（當然也有例外，DNA序列僅僅是一個(gè)參考指標）。

6.如何鑒定菌種

在杏鮑菇、白靈菇生產(chǎn)中，只有具備優(yōu)良的菌種，通過(guò)科學(xué)的培育管理，才能實(shí)現優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、高效。因此菌種的優(yōu)劣是事關(guān)千家萬(wàn)戶(hù)的切身利益和菌種生產(chǎn)廠(chǎng)家信譽(yù)的大事。在現實(shí)生產(chǎn)中，也常發(fā)現有的菌種廠(chǎng)以贏(yíng)利為目的，粗制濫造。加之有些菇農對菌種質(zhì)量缺乏識別能力，致使在生產(chǎn)中減產(chǎn)、絕收，造成巨大的經(jīng)濟損失。因此嚴格菌種質(zhì)量，加強對菌種的鑒定和識別是當前食用菌發(fā)展中的首要任務(wù)，也是最主要的技術(shù)環(huán)節和要求。

菌種質(zhì)量的鑒定，嚴格地講，應從形態(tài)、生理、栽培和經(jīng)濟效益等方面進(jìn)行綜合檢測和評價(jià)。但要完成各種指標，除了需掌握一定的基礎知識和基本技術(shù)外，還需具備一定的儀器設備及人力物力和時(shí)間。因此，一般生產(chǎn)者是很難完成的。這里僅將幾種常用、簡(jiǎn)便、易行的方法予以介紹，供生產(chǎn)者參考。

(1)直接觀(guān)察。

對引進(jìn)的母種，首先要用肉眼觀(guān)察包裝是否符合要求，棉塞有無(wú)松動(dòng)，試管有無(wú)破損，棉塞中有無(wú)雜菌和病蟲(chóng)害侵染，菌絲色澤是否正常、有無(wú)老化等現象。購進(jìn)或自制的原種，瓶?jì)染z應粗壯整齊、分枝濃密、色濃白呈絨毛狀，說(shuō)明生長(cháng)旺盛。如瓶底出現黃水、菌絲萎縮與瓶壁脫離，或出現原基扭結，說(shuō)明菌種老化應淘汰。（2）菌種純度檢查。

杏鮑菇菌絲是純白色的，白靈菇菌絲較杏鮑菇菌絲稍淺些。如在菌種管或菌種瓶中出現其他顏色的菌絲或孢子（綠色、黃色、黑色等），則說(shuō)明菌種不純，被雜菌污染不能使用。如果在接菌時(shí)發(fā)現菌種有異味也說(shuō)明菌種被雜菌污染，不能使用。（3）吃料能力鑒定。

將母種接入最佳配方的原種培養基中，或將原種接入栽培袋中觀(guān)察菌絲生長(cháng)情況。經(jīng)1周的培養，如果菌種塊能很快萌發(fā)并迅速向四周的培養料中生長(cháng)伸展，說(shuō)明菌種的吃料能力強。反之，菌種塊萌發(fā)后生長(cháng)緩慢，遲遲不向四周和料層深處伸展，則表明菌種對培養料的適應能力差。（4）觀(guān)察菌絲長(cháng)勢。

可先將供測的菌種接入其適宜的試管培養基上進(jìn)行培養，如果菌絲生長(cháng)整齊濃密、健壯有力，則表明為優(yōu)良菌種。若菌絲生長(cháng)緩慢或長(cháng)速太快，稀疏無(wú)力，參差不齊，容易衰老，則表明菌種質(zhì)劣。（5）栽培試驗觀(guān)察。

這是菌種質(zhì)量鑒定最可靠的方法。通過(guò)一定的栽培試驗，凡具備優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)、抗雜能力強和遺傳性穩定的菌株，才是優(yōu)良和可推廣應用的品種。

7.細菌鑒定辦法有哪些,詳細些哦~~

一 淀粉水解試驗 （一）實(shí)驗原理 細菌對大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質(zhì)分解。

胞外酶能分泌擴散到細胞外，將物質(zhì)分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸。這些小單位的物質(zhì)能被細菌吸收和利用。

水解過(guò)程可通過(guò)底物的變化來(lái)證明，如細菌水解淀粉的區域，用碘測定不再產(chǎn)生藍色；水解明膠可觀(guān)察到明膠被液化；脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸改變培養基的pH，其中的中性紅指示劑使培養基從淡紅色變?yōu)樯罴t色。（二）實(shí)驗方法 將淀粉培養基溶化后，冷至45℃左右，以無(wú)菌操作制成平板。

取18-24h的純培養物點(diǎn)于平板上，每皿可點(diǎn)種3-5個(gè)菌株，適溫培養2-4d，形成菌落后，在平板上滴加盧戈氏碘液，以鋪滿(mǎn)菌落周?chē)鸀槎龋桨宄伤{色。如果菌落周?chē)袩o(wú)色透明圈出現，說(shuō)明淀粉已經(jīng)被水解，實(shí)驗為陽(yáng)性，否則為陰性。

透明圈的大小一般說(shuō)明水解淀粉的能力。（三）實(shí)驗試劑的配制 肉湯蛋白胨瓊脂成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂17g，蒸餾水1000mL,pH7.2。

淀粉培養基制法：在肉湯蛋白胨瓊脂中添加0.2%的可溶性淀粉，校正pH值至7.6，分裝三角瓶，121℃ 20min滅菌備用。盧戈氏（Lugol）碘液：碘片1g，碘化鉀2g，蒸餾水300ml，先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘片溶解在碘化鉀溶液中，混勻，定容。

二 糖發(fā)酵試驗（一）實(shí)驗原理 單糖發(fā)酵是將葡萄糖，乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養基內，使其最終濃度為0.75-1%。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管，制成單糖發(fā)酵管，接種細菌經(jīng)37℃培養18-24小時(shí)，若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃，若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成，小倒管內則聚集有氣泡；不分解，則指示劑不變色。

（二）實(shí)驗材料 1.菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌18-24小時(shí)瓊脂斜面培養物。 2.培養基：葡萄糖發(fā)酵管，乳糖發(fā)酵管等。

（三）實(shí)驗方法1.將傷寒桿菌，大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內。 2.置37℃孵箱培養18-24小時(shí)。

3.觀(guān)察結果：由于一些細菌能分解某種糖類(lèi)產(chǎn)酸，所以培養基中pH下降到7.0以下，在酚紅指示劑的顯示下，培養基顏色由紅變黃。產(chǎn)酸者以“+”表示，如果同時(shí)產(chǎn)生氣體，則培養基中小倒管內有氣泡出現，此乃產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，以“⊕”表示，不分解，則指示劑不變色，用“-”表示。

（四）實(shí)驗結果 傷寒桿菌 大腸桿菌 葡萄糖 + ⊕ 乳 糖 - ⊕ （五）實(shí)驗試劑的配制1.單糖發(fā)酵管的制備： 成分：蛋白胨水培養基 100ml ,0.2%酚紅 1ml ，所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g 制法： （1）將上述成分溶化，混勻分裝于內含有倒置小玻璃管的小試管中，每管約2ml，加塞。 （2）小倒管排氣，滅菌（8-10磅，20-30分鐘），貯存備用。

用途：供單糖發(fā)酵試驗用。 2.0.2%酚紅配制法 酚紅（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ，蒸餾水 92ml 將酚紅入研缽徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨，再補足蒸餾水即成。

若需長(cháng)時(shí)間保存，可高壓滅菌后貯存備用。 三 甲基紅（M.R）試驗（一）實(shí)驗原理 某些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養基pH值降至4.5以下，加入甲基紅指示劑呈紅色，此為陽(yáng)性反應；若產(chǎn)酸量少或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉化為醇、醛、氣體和水等，則培養基的酸堿度仍在pH 6.2以上，加入甲基紅指示劑呈現黃色，為陰性反應。

（二）實(shí)驗材料1. 菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌18-24h瓊脂斜面培養物。 2. 培養基：葡萄糖蛋白胨水培養基。

3. 試劑：甲基紅試劑。 （三）實(shí)驗方法1. 分別將大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養基中。

2. 置37℃培養2-3天取出，分別滴加甲基紅試劑2-3滴，混勻，觀(guān)察結果。 （四）實(shí)驗結果 大腸桿菌：+，產(chǎn)氣桿菌：-。

（五）實(shí)驗試劑的配制1.甲基紅試劑的配制 甲基紅 0.04g, 95%酒精 60ml ， 蒸餾水 40ml 。先使甲基紅溶解于酒精中，再加入蒸餾水，混合，搖勻即成。

2.葡萄糖蛋白胨水培養物 成分：蛋白胨5g 葡萄糖5g 制法： （1）將上述成分溶解于蒸餾水中。 （2）調節pH至7.6，用濾紙過(guò)濾除渣。

（3）分裝中試管，每管約3-4ml，滅菌后備用。 用途：供甲基紅及V-P試驗用。

四 產(chǎn)吲哚（indole）試驗（一）實(shí)驗原理 某些細菌如大腸桿菌，變形桿菌等具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水培養基中的色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)（無(wú)色吲哚），再與歐立希試劑（對二甲基氨基苯甲醛）反應，形成紅色化合物—玫瑰吲哚，即為陽(yáng)性反應。 （二）實(shí)驗材料1. 菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌18-24小時(shí)瓊脂斜面培養物。

2. 培養基：蛋白胨水培養基。 3. 試劑，歐立希（Ehrlich）試劑（對二甲基氨基苯甲醛） （三）實(shí)驗方法1. 分別將大腸桿菌，傷寒桿菌接種于兩支蛋白胨水培養基中。

2. 置37℃培養2-3天后，每管沿管壁各加歐立希試劑0.5-1ml于培養液面上，待1-2分鐘后觀(guān)察結果：在交界面出現玫瑰紅色環(huán)即為吲哚試驗陽(yáng)性，無(wú)紅色環(huán)即為陰性。 （四）實(shí)驗結果 大腸桿菌：+ ；傷寒桿菌：- 。

（五）實(shí)驗試劑的配制1.蛋白胨水培養基的制備 成分：蛋白胨10g 氯化鈉5g 蒸餾水1000ml 制法： （1）先用少量蒸餾水將蛋白胨和氯化鈉相混合溶解，再加足蒸餾水量。 。