牛津的一所病理學(xué)院主任,澳大利亞籍的弗洛瑞(Howard Florey)對溶菌酶很感興趣,在這方面進(jìn)行了廣泛的研究種蒜的方法及過(guò)程。1938年的夏天,他的助手,一名從希特勒德國逃出的青年猶太難民錢(qián)恩(Ernst Chain),在文獻中發(fā)現了1929年弗萊明發(fā)表的關(guān)于青霉素的文章,經(jīng)弗洛瑞同意,他決定對青霉素進(jìn)行深入的研究。錢(qián)恩發(fā)現,青霉素可以用有機溶劑(乙醚)從霉菌的培養液中提取出來(lái)。從這種性質(zhì)看,他感到青霉素不大可能是一種酶,而是小分子化合物(酶通常是蛋白質(zhì),是由許多種氨基酸形成的有機大分子,它們不可能溶解于像乙醚這樣的有機溶劑中)。但e78988e69d他也遇到了同樣的麻煩,青霉素的性質(zhì)很不穩定,不容易從溶液中得到。但這并沒(méi)有使他氣餒,而是更引起了他的研究興趣。
第二次世界大戰爆發(fā)后,需要大量和多種的殺菌消炎藥物,特別是在有膿血存在下仍有殺菌作用的藥物,而磺胺類(lèi)藥物在這種情況下是無(wú)效的。青霉素在有膿血存在下,仍有殺菌作用,因此它成為深入研究的對象。錢(qián)恩從醫學(xué)研究委員會(huì )和洛克菲勒基金會(huì )得到資助。在弗洛瑞的指導下,整個(gè)病理學(xué)院都投入到對青霉素的研究中,使研究的步伐加快了。為了能得到更多的青霉素,他們加大了培養量,并用圓柱形的大瓶子進(jìn)行培養。然而結果是,青霉素的生成量并沒(méi)有增加多少。后來(lái),他們發(fā)現培養液在 1.5 cm的深度時(shí),青霉素的生成量最多,培養液太深反而不行,因為青霉菌的生長(cháng)需要氧氣。這樣他們就把瓶子橫放著(zhù)來(lái)培養,可是瓶子是圓柱形的,橫放著(zhù)要滾動(dòng),同時(shí)這種圓柱形的瓶子,放 1.5 cm深的培養液,有效體積太小了,于是又改成扁平的瓶子。最后,他們設計了一種陶瓷的、像醫院病人在病床上使用的便盆樣子的培養器皿。錢(qián)恩等人在研究中發(fā)現,可以用極弱的堿性水溶液將青霉素從乙醚溶液中提取出來(lái)。這樣,就可以用比乙醚液體積小得多的微堿性水溶液把青霉素從乙醚液中提取出來(lái),達到濃縮的目的。他們設計了機械的逆流提取設備,那是一根比較粗的、兩端密封的玻璃管,在兩端各有兩個(gè)側管,讓經(jīng)過(guò)濾除青霉菌并酸化后的培養液從玻璃管上端的一個(gè)側管向下流,同時(shí)讓乙醚自玻璃管下端的一個(gè)側管向上流動(dòng),兩種液體在玻璃管中混合。因為乙醚的相對密度比水輕許多,所以青霉素被乙醚提取后,便隨乙醚液從玻璃管上端的另一側管流出來(lái)。然后還是用這種設備,讓微堿性的水溶液從玻璃管上端的一個(gè)側管向下流,同時(shí)讓提取了青霉素的乙醚液從玻璃管下端的一個(gè)側管向上流。這樣青霉素就從乙醚中轉移到微堿性的水溶液中。但是,錢(qián)恩等人沒(méi)有辦法把極不穩定的青霉素從水溶液中分離出來(lái)。后來(lái)他試用了1935年瑞典人發(fā)明的冷凍干燥法。此法是將水溶液在低溫下冷凍結冰,然后在冷凍及高真空下使水在固體狀態(tài)下升華,溶液中的固體就剩余在容器中。這樣他們就把微堿性青霉素水溶液濃縮為棕色粉末。青霉素在非常低的溫度下,沒(méi)有被分解破壞。他們對這種棕色粉末的效價(jià)進(jìn)行測定,1mg棕色粉末相當于5個(gè)牛津單位(這是他們自己制定的效價(jià)單位。他們把1mL培養液中的青霉素用鏈球菌①做試驗,把對它的抑菌能力定為1個(gè)牛津單位)。
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